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植物總糖和還原糖檢測試劑盒

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蛋白提取,細胞分析

保存溫度
2-8℃ 避光
注意事項
開蓋后組份按要求條件保存。
有效期
一年
檢測方法
分光光度計
適用樣本
植物
產(chǎn)品應(yīng)用
分光光度計
儀器準(zhǔn)備
1.離心機
2.水浴鍋或恒溫箱
3.分光光度計

試劑準(zhǔn)備
1.蒸餾水
2.氫氧化鈉溶液
耗材準(zhǔn)備
1.離心管
2.吸頭
使用注意事項
1. 試劑盒里的低溫試劑避免反復(fù)凍融,以免失效或效率下降;
2. 待測樣品如不能及時測定,請置于2-8℃保存,3天內(nèi)穩(wěn)定;
3. 如果樣品還原糖濃度過高,用蒸餾水稀釋后測定,結(jié)果乘以稀釋倍數(shù);
4. 總糖計算公式在測定干擾雜質(zhì)很少、還原糖含量相對總糖含量很少時使用,x0.9 是為了從測定出的總糖水解成單糖中,扣除水解時所消耗的水量。
使用方法
1. 還原糖的提?。?br>①稱取植物樣品0.5-3g,剪碎,加入蒸餾水約3ml勻漿,轉(zhuǎn)移至燒杯或三角瓶中,用12ml蒸餾水沖洗研磨器2-3次,洗出液也轉(zhuǎn)移至該容器。
②50℃水浴30min,并不時攪拌,以便還原糖浸出。
③將沉淀和浸出液轉(zhuǎn)移至50ml離心管,4000g離心5min。
④留取上清液,向沉淀中加入20ml蒸餾水,混勻,再次4000g離心5min。
⑤留取上清液,將2次獲得的上清液合并,用蒸餾水定容至100ml(提取液),混勻,作為還原糖待測液。

2. 總糖的水解和提?。?br>①稱取植物樣品0.5-3g,剪碎,加入蒸餾水約3ml勻漿,轉(zhuǎn)移至燒杯或三角瓶中,用12ml蒸餾水沖洗研磨器2-3次,洗出液也轉(zhuǎn)移至該容器。
②向容器中加入10ml 6M鹽酸溶液,攪拌均勻,煮沸30min,并不時攪拌。
③取2滴滴加于載玻片上,滴加1滴顯色液,檢查水解是否,如已經(jīng)水解,則不顯示藍色。
④水解完畢后,冷卻至室溫,加入6M氫氧化鈉溶液,使溶液pH至7.4,用蒸餾水定容至100ml,混勻,4000g離心5min或過濾。
⑤取上清或濾液10ml,用蒸餾水定容至100ml,成稀釋1000倍的總糖水解液(提取液),取1ml總糖水解液,測定其還原糖的含量。

3. 制作葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線:
取干凈離心管或試管,按下表進行操作,以0號調(diào)零,檢測540nm處吸光度,以吸光度值為縱坐標(biāo),各標(biāo)準(zhǔn)濃度(mg/ml)為橫坐標(biāo)作圖得標(biāo)準(zhǔn)曲線。
4、還原糖測定:
取制備好的還原糖提取液或者總糖水解液1ml,分別加入DNS檢測液2ml,其余操作同標(biāo)準(zhǔn)曲線的操作,540nm處測定各管的吸光度。

5. 計算:
還原糖的百分含量:還原糖含量(%)=(C x VT)/(m x Vs) x 100

總糖的百分含量:總糖含量(%)=(C x VT)/(m x Vs) x 100x 10 x 0.9

式中:C=從標(biāo)準(zhǔn)曲線查的糖量(mg)
VT=提取液的體積(ml)
m=植物樣品的質(zhì)量(mg)
Vs=測定時用的樣品體積(ml)



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