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細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)
- 公司名稱 伊萊博生物科技(上海)有限公司
- 品牌 其他品牌
- 型號
- 產(chǎn)地
- 廠商性質(zhì) 代理商
- 更新時(shí)間 2024/6/17 11:41:45
- 訪問次數(shù) 345
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實(shí)驗(yàn)步驟
標(biāo)記六孔板
用marker筆在六孔板底部畫平行線,平行線之間的距離0.5cm,為了保證后續(xù)拍照位置是相同的;
鋪板
細(xì)胞重懸鋪板,密度控制在第二天長滿,若過夜后細(xì)胞wq長滿,也可以適當(dāng)延長培養(yǎng)時(shí)間,但如果細(xì)胞密度已經(jīng)很大,盡量重新鋪板,因?yàn)榭赡苓^一天后細(xì)胞太滿,會導(dǎo)致細(xì)胞狀態(tài)逐漸變差,后續(xù)細(xì)胞可能不遷移而是凋亡;
制造劃痕
第二天用直尺比著使用10ul槍頭制造劃痕,劃痕方向與標(biāo)志線垂直,最好保持力度一致,盡量一次性劃完,然后PBS沖洗3次,洗去漂浮的細(xì)胞
為了減少細(xì)胞增殖所引起的假陽性結(jié)果,降低細(xì)胞增殖對實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響,將wq培養(yǎng)基換成無血清培養(yǎng)基和低血清培養(yǎng)基(FBS<2%繼續(xù)培養(yǎng)細(xì)胞);
拍照
拍照前最好用PBS沖洗3次,一般認(rèn)為24h為細(xì)胞的一個(gè)周期,所以檢測時(shí)間最好不要超過一個(gè)周期的時(shí)間,按照6孔板背后畫線的垂直方向劃痕