TCR（T 細(xì)胞受體）蛋白復(fù)合物存在于 T 細(xì)胞表面，負(fù)責(zé)識(shí)別與 MHC（主要組織相容性復(fù)合物）分子結(jié)合的抗原。 TCR 的刺激會(huì)導(dǎo)致下游 NFAT（激活 T 細(xì)胞核因子）信號(hào)的激活。 NFAT 是一個(gè)轉(zhuǎn)錄因子家族，在免疫反應(yīng)中具有重要功能，例如通過(guò)誘導(dǎo) T 細(xì)胞中各種細(xì)胞因子（例如白細(xì)胞介素 2 至 4 和 TNF-α）的表達(dá)。 NFAT 受 Ca2+ 和 Ca2+/鈣調(diào)蛋白依賴(lài)性磷酸酶鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶調(diào)節(jié)。

TCR 由兩條不同蛋白質(zhì)鏈的異二聚體組成，其中 α (α) 和 β (β) 鏈?zhǔn)侵饕湣?/span> 使用CRISPR/Cas9基因組編輯去除α鏈和β鏈的TRAC（T細(xì)胞受體α常數(shù)）和TRBC1（T細(xì)胞受體β常數(shù)1）區(qū)域，導(dǎo)致TCR丟失。

該細(xì)胞系是通過(guò)使用慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)（CD8a 慢病毒，BPS Bioscience #78648）外源過(guò)度表達(dá)人 CD8 (NM_001768.6)，從 TCR 敲除 NFAT 熒光素酶報(bào)道 Jurkat 細(xì)胞系 (BPS Bioscience #78556) 生成的。 為了實(shí)現(xiàn) TCR（T 細(xì)胞受體）的敲除，通過(guò) CRISPR/Cas9 基因組編輯從重組體中去除 TCRα/β 鏈的 TRAC（T 細(xì)胞受體 Alpha Constant）和 TRBC1（T 細(xì)胞受體 Beta Constant 1）結(jié)構(gòu)域。 Jurkat 細(xì)胞在 NFAT 反應(yīng)元件的控制下穩(wěn)定表達(dá)螢火蟲(chóng)熒光素酶基因。

通過(guò)基因組測(cè)序和流式細(xì)胞術(shù)證實(shí)了TCR敲除NFAT-熒光素酶報(bào)告基因Jurkat細(xì)胞中的TCRα/β敲除，并通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)證實(shí)了CD8的表達(dá)。 該細(xì)胞系已經(jīng)過(guò)功能驗(yàn)證，與親本 NFAT-熒光素酶報(bào)告 Jurkat 細(xì)胞 (BPS Bioscience #60621) 不同，該細(xì)胞系不會(huì)對(duì)抗 CD3 激動(dòng)劑抗體產(chǎn)生反應(yīng)。