一、服務(wù)簡(jiǎn)介

端粒酶（Telomerase）是由RNA和蛋白質(zhì)組成的一種核糖核蛋白酶。人端粒酶RNA組分(hTR)于1995年被克隆，其中含有端粒重復(fù)序列的模板（5’-CUAACCCUAAC-3’）；蛋白質(zhì)組分具有RNA依賴的DNA多聚酶活性。端粒酶能以自身RNA為模板復(fù)制合成端粒序列，端粒DNA是一系列重復(fù)的富含G的DNA序列，這一序列在生物進(jìn)化中具有高度的保守型（-TTAGGG-),端粒在保護(hù)基因組DNA不被降解、防止染色體有害變異（染色體末端融合、重排、移位和缺失等）起重要作用）。端粒酶的功能包括添加端粒重復(fù)序列，端粒長(zhǎng)度的穩(wěn)定和維持，以及染色體的整體空間取向、結(jié)構(gòu)完整性和穩(wěn)定性。

在胚性細(xì)胞等增殖活躍的細(xì)胞中具有端粒酶活性，而在正常成熟體細(xì)胞中端粒酶失活，同時(shí)還發(fā)現(xiàn)絕大多數(shù)永生性細(xì)胞株和腫瘤細(xì)胞株都呈端粒酶陽(yáng)性，而在癌旁組織和正常組織中陽(yáng)性率則很低，推測(cè)端粒酶可能是一個(gè)廣泛的腫瘤標(biāo)志物，端粒酶反應(yīng)超越了細(xì)胞的增殖限制，這可能是惡性腫瘤發(fā)生的一個(gè)先決條件。

傳統(tǒng)的端粒酶研究方法是以探針延伸為基礎(chǔ)測(cè)定端粒酶活性，需要大量的樣品材料，且檢驗(yàn)靈敏度受限，直到1994 年kim等采用端粒重復(fù)擴(kuò)增法（Telomeric Repeat Amplification Protocol,TRAP）所取代。標(biāo)準(zhǔn)的TRAP法檢測(cè)是通過(guò)PCR擴(kuò)增端粒酶反應(yīng)的產(chǎn)物，使用放射性標(biāo)記，經(jīng)凝膠電泳后，通過(guò)放射自顯影顯示檢測(cè)結(jié)果。該方法相較于傳統(tǒng)的方法，檢測(cè)靈敏度有所提升，然而在檢測(cè)環(huán)節(jié)仍然操作繁瑣，且結(jié)果判讀存在主觀性。

我公司采用的CELL STR ID®端粒酶TRAP+CE檢測(cè)方法，提升了檢測(cè)效率（全流程：4-6h），結(jié)果判讀更加自動(dòng)化和標(biāo)準(zhǔn)化，且檢測(cè)靈敏度也有大幅度地提升。

二、服務(wù)內(nèi)容

（一）服務(wù)流程

（二）服務(wù)特點(diǎn)

1．取適量蛋白提取物，參照TRAP 法，對(duì)端粒酶底物進(jìn)行擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物在ABI 3130XL 型遺傳分析儀上進(jìn)行毛細(xì)管電泳檢測(cè)和分析。

2．靈敏度高。

3．鑒定報(bào)告中文版，以及圖譜（見(jiàn)端粒酶檢測(cè)圖譜）。

（三）注意事項(xiàng)

1．樣品寄送：細(xì)胞數(shù)量≥10⁶個(gè)，1.5ml離心管；干冰運(yùn)輸。

2．正常檢測(cè)周期5-7個(gè)工作日。

（四）結(jié)果交付

檢測(cè)結(jié)果以電子版的形式發(fā)放到訂單或合同上面預(yù)留的郵箱，書(shū)面報(bào)告可根據(jù)需要隨時(shí)提供，寄送到貴單位。

三、檢測(cè)端粒酶活性的常用方法：

1、直接檢測(cè)端粒酶（蛋白及RNA的結(jié)合復(fù)合物）的活性，檢測(cè)它是否可以延伸RNA模板，然后跑膠或者探針雜交，檢測(cè)端粒cDNA延伸的長(zhǎng)度，以此來(lái)判斷端粒酶的活性高低。（TRAP法）

不足：經(jīng)典方法，但該方法需要放射性同位素標(biāo)記及制膠；重復(fù)性差、周期長(zhǎng)、主觀判讀等。

2、間接檢測(cè)端粒酶組分（催化亞基的mRNA量）的表達(dá)量。

不足：本質(zhì)是檢測(cè)端粒酶的一個(gè)組分蛋白TERT的mRNA的表達(dá)量, 但是在多數(shù)細(xì)胞中，端粒酶催化亞基的表達(dá)很難檢測(cè)到,且mRNA的表達(dá)量并不一定能準(zhǔn)確反映端粒酶的活性強(qiáng)度，因端粒酶是一種由RNA及多種蛋白組成的復(fù)合物，TERT酶只是其中較為主要的一種蛋白。

四、北京美德華生端粒酶檢測(cè)（TRAP+CE）流程：

1 樣本處理：端粒酶提取試劑盒，按照操作說(shuō)明書(shū)，取適量細(xì)胞提取蛋白。-80°保存待用。

2 端粒擴(kuò)增：端粒酶擴(kuò)增試劑盒，按照操作說(shuō)明，擴(kuò)增端粒重復(fù)序列。

3 端粒序列檢測(cè)：毛細(xì)管電泳檢測(cè)，按照操作說(shuō)明進(jìn)行檢測(cè)。

4 端粒擴(kuò)增產(chǎn)物結(jié)果分析： 按照SOP進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。

5 報(bào)告整理：

五、相關(guān)文獻(xiàn)：

1. Telomeres and telomerase: three decades of progress  JW Shay, WE Wright - Nature Reviews Genetics, 2019 - nature.

2. Alternative lengthening of telomeres: Models, mechanisms and implications. Nat Rev Genet. 11:319–330. 2010. View Article : Google Scholar : PubMed/NCBI

3. Telomerase activity concentrates in the mitotically active segments of human hair follicles. J Invest Dermatol. 108:113–117. 1997. View Article : Google Scholar : PubMed/NCBI

4. Detection of telomerase activity in human cells and tumors by a telomeric repeat amplification protocol (TRAP)  Methods in Cell Science 17: 1-15, 1995