13906ES65 RT-LAMP pH Sensitive Dyestuff Kit
- 公司名稱 翌圣生物科技(上海)股份有限公司
- 品牌 Yeasen/翌圣生物
- 型號(hào) 13906ES65
- 產(chǎn)地 上海
- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)廠家
- 更新時(shí)間 2022/6/1 11:37:30
- 訪問(wèn)次數(shù) 485
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供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 100t |
---|---|---|---|
貨號(hào) | 13906ES65 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 制藥,綜合 |
產(chǎn)品信息
產(chǎn)品名稱
產(chǎn)品編號(hào)
規(guī)格
價(jià)格(元)
RT-LAMP pH Sensitive Dyestuff Kit
13906ES65
100 T
1,795.00
13906ES80
1,000 T
15,795.00
13906ES92
10,000 T
135,795.00
產(chǎn)品描述
本產(chǎn)品將LAMP可視光染料整合到buffer中,buffer中含dATP、dCTP、dGTP和dUTP等Bst II DNA Polymerase擴(kuò)增必須的組分,同時(shí)包含pH 敏感指示劑,試劑盒含有無(wú)甘油Bst II DNA Polymerase、UDGase、RT enzyme等,可用于凍干反應(yīng)體系的配制;同時(shí)減少了加樣操作,降低操作誤差,在極大程度上抑制假陽(yáng)性反應(yīng),提高檢測(cè)的準(zhǔn)確度。本試劑盒具有較高的擴(kuò)增效率和靈敏度,擴(kuò)增結(jié)果可肉眼判斷,陽(yáng)性反應(yīng)孔為橙黃色,陰性反應(yīng)孔為洋紅色,反差極大。
產(chǎn)品組分
組分編號(hào)
組分名稱
產(chǎn)品編號(hào)/規(guī)格
13906ES65 (100 T)
13906ES80 (1,000 T)
13906ES92 (10,000 T)
13906-A
2.5×pH Sensitive Reation Buffer
1 mL
10 mL
100 mL
13906-B
無(wú)甘油RT酶Mix
30 μL
300 μL
3 mL
13906-C
無(wú)甘油Bst酶
50 μL
500 μL
5 mL
運(yùn)輸和保存方法
Part I:組分13906-A【2.5×pH Sensitive Reation Buffer】干冰運(yùn)輸,-20°C保存,有效期6個(gè)月。
Prat II:組分13906-B\C【無(wú)甘油RT酶Mix\Bst酶】冰袋運(yùn)輸,4°C保存,有效期6個(gè)月。
注意事項(xiàng)
1. 使用本試劑前請(qǐng)仔細(xì)閱讀說(shuō)明書。
2. 整個(gè)實(shí)驗(yàn),應(yīng)規(guī)范操作,包括反應(yīng)體系的配制、樣本處理及加樣。
3. 為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
使用方法
1. 待檢樣本準(zhǔn)備
核酸提取后樣本:直接作為模板,加入反應(yīng)體系中。
煮沸法:臨床采集的拭子樣本直接放入水中,置于95°C水浴鍋或金屬浴中進(jìn)行5 min的熱裂解,釋放核酸,混勻后即可作為模板加入反應(yīng)體系中。
【注】:1)處理樣本的試劑不能使用強(qiáng)酸或強(qiáng)堿的核酸釋放劑,若必須使用,則樣本處理完后,需將樣本的pH調(diào)節(jié)至8.0。
2)加入的樣本中,避免使用Tris-HCl等高濃度的緩沖體系,避免pH指示劑不能發(fā)生變色,影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果判讀。
2. 反應(yīng)體系
將A組分從-20°C取出,溶解后顛倒混勻,瞬時(shí)離心確保所有液體落到管底。根據(jù)待檢測(cè)樣品量,配制如下體系(通常實(shí)驗(yàn)需要設(shè)置陰性對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照):
組分
單次反應(yīng)體積(μL)
終濃度
2.5×pH Sensitive Reation Buffer
10
1×
Bst酶
0.5
0.32 U/µL
RT酶Mix
0.3
-
10×Primers 2
2.5
1×
模板3
10 ng-1 µg
-
加ddH2O至
25
-
【注】:
1)陰性對(duì)照推薦設(shè)置空白(不加模板)對(duì)照以及NTC(一般為水)對(duì)照。
2)10×Primers:16 µM FIP/BIP,2 µM F3/B3,4 µM Loop F/B each。
3)模板加入量在1-8 µL內(nèi)調(diào)整;推薦模板RNA溶解于DEPC水中。
3. 加樣
1)如果反應(yīng)是在水浴鍋中進(jìn)行,則每管加入20 μL礦物油(自備),以防止液體蒸發(fā)導(dǎo)致結(jié)果的誤差。如果反應(yīng)是在PCR儀中進(jìn)行,不需要加礦物油(請(qǐng)開(kāi)啟熱蓋)。
2)為避免污染,建議用戶在超凈臺(tái)中配制組分,在其他房間的通風(fēng)櫥中加入模板以免出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果。
3)由于本試劑使用的是pH指示劑法,該試劑中的緩沖液能力較弱,試劑不可長(zhǎng)期接觸空氣,否則會(huì)吸附空氣中的二氧化碳致使試劑變酸,導(dǎo)致試劑顏色變淺,影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果判讀。
4. 反應(yīng)條件
溫度
時(shí)間
作用
25-37°C
2-5 min
降解含U模板
60-65°C
30 min
恒溫?cái)U(kuò)增
85°C
5 min
失活
【注】:
1)本試劑盒所用酶對(duì)溫度非常敏感,強(qiáng)烈建議使用PCR儀操作;如用水浴鍋,應(yīng)先加熱使其達(dá)到規(guī)定溫度后再反應(yīng)。溫差超過(guò)2°C,將導(dǎo)致擴(kuò)增效率降低,使陽(yáng)性反應(yīng)無(wú)法在說(shuō)明書規(guī)定的時(shí)間內(nèi)洋紅色變成橙黃色。
2)反應(yīng)溫度需要根據(jù)引物的Tm值進(jìn)行調(diào)整。
3)反應(yīng)時(shí)間依據(jù)模板濃度而定,低濃度模板可能需要60 min時(shí)間才能有比較明顯的反應(yīng)。
5. 結(jié)果判斷
反應(yīng)30 min后,立刻取出反應(yīng)管,待降溫至室溫后,置于光線良好的環(huán)境中觀察(建議以白紙作為背景)。如反應(yīng)液為洋紅色,則為陰性結(jié)果;如反應(yīng)液為橙黃色則為陽(yáng)性結(jié)果。
【注】:反應(yīng)的時(shí)間必須準(zhǔn)確計(jì)時(shí),超過(guò)說(shuō)明書規(guī)定的反應(yīng)時(shí)間可能會(huì)出現(xiàn)假陽(yáng)性。反應(yīng)管不可開(kāi)蓋,否則會(huì)污染,影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
HB220518