人P選擇素(P-Selectin/CD62P/GMP140)ELISA Kit

人P選擇素(P-Selectin/CD62P/GMP140)ELISA Kit標(biāo)本必須為液體，不含沉淀。包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等。1ml的全血可得到0.5ml的血清或血漿。每個標(biāo)本量收集體積＝100ul×檢測種類。

 血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。收集上清。如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。血漿：應(yīng)根a據(jù)試劑盒的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，加入10％(v/v)抗凝劑(0.1M檸檬酸鈉或1% heparin 或2.0%EDTA.Na2)混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。尿液、胸腹水、腦脊液：用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。細(xì)胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時，用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。  組織標(biāo)本：切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS，緩沖液中可加入1μg/L蛋白酶抑制劑或50U/ml的Aprotinin(抑肽酶)。用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清置于-20度或- 70度保存，如有必要，可以將樣品濃縮干燥。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。

1.快速提?。?5分鐘快速基因組DNA提取，無需組織裂解試劑，實驗過程無需調(diào)pH值、離心；
2.快速分型擴(kuò)增：45分鐘快速高效擴(kuò)增；
3.擴(kuò)增試劑：分熱啟動型和非熱啟動型兩種，含有染料，擴(kuò)增后可直接電泳；
4.減少繁瑣步驟，降低污染風(fēng)險；
5.高通量操作：可在PCR儀上批量處理樣本；
6.擴(kuò)增產(chǎn)物末端加A，且可進(jìn)行下游酶切、測序等；
7.節(jié)約成本，提取+擴(kuò)增，合計低于6元。

【生物分子】 抗生素/抗真菌素 維生素 氨基酸 核苷酸 脂 糖類 白三烯 前列腺素 藥物結(jié)合物 抗氧化劑 藥理活性化合物 類固醇激素結(jié)合物 半抗原反應(yīng) 半抗原載體結(jié)合物 放射性核素 血小板活化素 tRNA 活性染料和化合物 親和素/鏈霉親和素
【蛋白質(zhì)/抗原/多肽】 免疫球蛋白 封閉肽 人蛋白和抗原 小鼠蛋白和抗原 細(xì)菌蛋白和抗原 病毒蛋白和抗原 植物蛋白和抗原 其它蛋白和抗原 細(xì)胞質(zhì)蛋白 總蛋白 膜蛋白 核蛋白 細(xì)胞裂解和提取物 線粒體蛋白 細(xì)胞裂解 組織提取 重組細(xì)胞因子 
【常用生化試劑】EDTA DTT Tris SDS MOPS HEPES 水 分子生物學(xué)緩沖液 蛋白生化緩沖液 去垢劑 染色試劑 溶劑 酸堿 化學(xué)試劑 其它生化試劑
【PCR/RT-PCR/qPCR】PCR試劑 PCR對照 特異性PCR試劑盒 PCR克隆試劑盒 RNA 載體及構(gòu)建 PCR克隆載體 M13克隆載體 細(xì)菌克隆載體 文庫及構(gòu)建 cDNA文庫 基因組文庫 噬菌體展示文庫
【酶】限制性內(nèi)切酶 蛋白酶 核酸酶 激酶 聚合酶 連接酶
【cDNA及合成純化】cDNA全長基因 RNA cDNA合成 cDNA相關(guān)試劑
【核酸/蛋白合成】Oligo純化 核酸合成柱 核酸合成試劑
【克隆與表達(dá)】克隆基因 克隆試劑盒 克隆篩選
【表達(dá)分析】 Northern印跡分析 分支DNA和mRNA定量
【蛋白分析】 PAGE凝膠制備 蛋白電泳試劑 預(yù)制蛋白凝膠
【核酸純化】 DNA凝膠純化 DNA提取純化 PCR產(chǎn)物純化
【RNAi技術(shù)】 siRNA 反義寡核苷酸 RNAi定量 RNAi文庫
【蛋白檢測】 Western印跡 報告基因檢測 蛋白檢測試劑盒
【實驗動物】 轉(zhuǎn)基因動物 小鼠 大鼠 模式動物
【臨床檢測試劑】 生化檢測 遺傳學(xué)檢測 血液檢測
【相關(guān)檢驗試劑】 食品安全檢測 藥品安全檢測
【蛋白純化】 蛋白提取 蛋白透析 蛋白定量 蛋白穩(wěn)定
【細(xì)胞培養(yǎng)】 血清 血清替代物 細(xì)胞培養(yǎng)基 細(xì)胞 細(xì)胞株 感受態(tài)細(xì)胞 新鮮細(xì)胞分離
【干細(xì)胞】 干細(xì)胞/祖細(xì)胞 原代細(xì)胞 干細(xì)胞培養(yǎng)基
【蛋白修飾】 蛋白標(biāo)記 載體蛋白結(jié)合 其它
【細(xì)胞生物學(xué)檢測】 細(xì)胞凋亡 細(xì)胞分離 細(xì)胞增殖
【藥物篩選】 熒光素細(xì)胞活力/增殖/毒性檢測
【免疫檢測】 放射性免疫檢測 化學(xué)發(fā)光免疫檢測

 現(xiàn)在一般完整的試劑盒應(yīng)該有一下幾個組成：

 （1）已包被抗原或抗體的固相載體（免疫吸附劑）；

（2）酶標(biāo)記的抗原或抗體（結(jié)合物）；

（3）酶的底物；

（4）陰性對照品和陽性對照品（定性測定中），參考標(biāo)準(zhǔn)品和控制血清（定量測定中）；

（5）結(jié)合物及標(biāo)本的稀釋液；

（6）洗滌液，在板式ELISA中，常用的稀釋液為含0.05%吐溫20磷酸緩沖鹽水；

（7）酶反應(yīng)終止液，常用的HRP反應(yīng)終止液為硫酸，其濃度按加量及比色液的體積而異，在板式ELISA中一般采用3mol/L。

【原理】

是利用固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測。先將生物素標(biāo)記的抗體同時溫育。洗滌后，加入親和素標(biāo)記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物，然后加入底物A、B，和酶結(jié)合物同時作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中的濃度呈比例關(guān)系。
具體可總結(jié)為：
①抗原或抗體能吸附到固相載體表面，并保持其免疫學(xué)活性；
②抗原或抗體可通過共價鍵與酶連接形成酶結(jié)合物，仍保持其免疫學(xué)和酶學(xué)活性；
③酶結(jié)合物與相應(yīng)抗原或抗體結(jié)合后，可根據(jù)加入底物的顏色反應(yīng)來判定是否有免疫反應(yīng)的存在，而且顏色反應(yīng)的深淺是與標(biāo)本中相應(yīng)抗原或抗體的量成正比例，因此，可以按底物顯色的程度顯示試驗結(jié)果。
ELISA常用的方法主要包括雙抗體夾心法、間接法、競爭法以及BAS-ELISA。

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