40740ES50 線粒體紅色熒光探針
- 公司名稱 翌圣生物科技(上海)股份有限公司
- 品牌 Yeasen/翌圣生物
- 型號 40740ES50
- 產(chǎn)地 上海
- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)廠家
- 更新時間 2022/2/10 14:57:42
- 訪問次數(shù) 395
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供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 50ug |
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貨號 | 40740ES50 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè) |
產(chǎn)品信息
產(chǎn)品名稱
產(chǎn)品編號
規(guī)格
價格(元)
MitoTracker® Red CM-H2XRos線粒體紅色熒光探針
40740ES50
50 µg
425.00
產(chǎn)品描述
MitoTracker® Red CM-H2XRos是一種細胞滲透型的dihydro-X-rosamine衍生物,包含標記線粒體的弱巰基反應(yīng)性的氯甲基官能團。本品是一種還原型的紅色熒光染料(Ex=579 nm,Em=599 nm),本身不發(fā)熒光。只需簡單孵育細胞,即可被動運輸穿過細胞膜,進入細胞后被氧化為發(fā)熒光且具線粒體選擇性的探針,聚集在活性線粒體上。一旦線粒體被染色后,還能根據(jù)后續(xù)實驗的需求進行固定(醛類固定劑如甲醛)和透化(醛類去污劑如Triton X-100),探針依然維持在細胞內(nèi)。本品適合雙標實驗,因其紅色熒光與其他的綠色熒光探針具有良好的分辨率。
雖然傳統(tǒng)的線粒體熒光探針如TMR和羅丹明123,也能很容易的聚集在功能線粒體上,但是一旦線粒體膜電位喪失即會被洗掉,從而在一些需要細胞進行醛類固定或者包含線粒體能量狀態(tài)影響因子的實驗中,使其應(yīng)用大受限制。
產(chǎn)品性質(zhì)
CAS號(CAS NO.)
167095-08-1
分子式(Molecular Formula)
C32H33ClN2O
分子量(Molecular Weight)
497.08
Ex/Em
579/599 nm
外觀(Appearance)
紫色固體
結(jié)構(gòu)式(Structure)
運輸和保存方法
室溫運輸;-20℃避光干燥保存,有效期1年。
使用方法
1. 儲存液的配制
本品是以粉末形式提供,使用前需將本品回溫至室溫。
之后使用細胞培養(yǎng)級別的無水DMSO(如Yeasen,貨號:60313ES60)將其充分溶解至終濃度1 mM。
本品M. Wt.= 497.08 g/mol,換算下來,50 µg粉末只需加入100.6 µL DMSO即可得到1 mM儲存液。根據(jù)單次的使用量將儲存液分裝后放到-20℃避光,避免反復(fù)凍融。特別注意:由于本品是還原型的化合物,對氧氣相當敏感,特別是在溶液中,為了保持產(chǎn)品的穩(wěn)定性,產(chǎn)品分裝后充氮氣或者氬氣等惰性氣體以防止在凍存的過程中被氧化。
2. 工作液的配制
根據(jù)不同的實驗?zāi)康氖褂貌煌奶结槤舛?,以下的起始操作條件僅作參考,可根據(jù)細胞類型和其他的相關(guān)因素如細胞或組織的透化等進行適當調(diào)整。
用適當?shù)木彌_液或細胞培養(yǎng)基稀釋1 mM儲存液至工作液濃度。一般推薦使用濃度為25-500 nM。對于后續(xù)需要做固定或透化的樣本,推薦工作濃度為100-500 nM,為了降低過度加載導(dǎo)致的潛在偽影和線粒體毒性,在不影響實驗結(jié)果的前提下應(yīng)盡可能低濃度染色。另外,濃度過高也可能對其他細胞結(jié)構(gòu)進行染色。
注意:1)本品MitoTracker® Red CM-H2XRos是還原型的熒光探針,使用的工作液濃度比氧化型(MitoTracker® Red CM-XRos)的濃度一般高3~5倍。以上推薦的濃度是針對氧化型MitoTracker® Red CM-XRos,請使用本品(還原型)時進行適當?shù)臐舛日{(diào)整。2)血清中可能含氧化酶,影響本還原型探針的穩(wěn)定性,因此,不建議使用含血清的*培養(yǎng)基稀釋儲存液。
3. 染色及檢測
1)貼壁細胞的染色
培養(yǎng)皿/板內(nèi)加入適量的培養(yǎng)基覆蓋蓋玻片進行爬片培養(yǎng)。當細胞長至所需豐度,吸除培養(yǎng)液,加入37℃預(yù)熱的MitoTracker® Red CM-H2XRos染色工作液。在所使用細胞正常培養(yǎng)條件下孵育15-45 min(最佳孵育時間需優(yōu)化)。染色結(jié)束后,使用新鮮培養(yǎng)液或緩沖液替換上述染色液,即可將其置于熒光顯微鏡下觀察或熒光酶標儀下讀數(shù)?;蛘哌M行后續(xù)的固定和透化步驟,見步驟4。
2)懸浮細胞的染色
離心收集細胞,吸除上清,利用37℃預(yù)熱的MitoTracker® Red CM-H2XRos染色工作液輕輕重懸細胞。在所使用細胞正常培養(yǎng)條件下孵育15-45 min(最佳孵育時間需優(yōu)化)。染色結(jié)束后,離心收集細胞,利用37℃預(yù)熱的新鮮培養(yǎng)液或緩沖液重懸細胞,被染色的細胞可用流式細胞儀、熒光酶標儀、熒光顯微鏡進行分析。
如果需要蓋玻片上固定化的細胞,那么可在鋪片前先用多聚賴氨酸(poly-D-lysine)包被載玻片或蓋玻片。
或者進行后續(xù)的固定和透化步驟,見步驟4。
4. 固定和透化
1)染色結(jié)束后,利用培養(yǎng)液或緩沖液清洗細胞;
2)小心吸走清洗液。換用新鮮配制且預(yù)熱的含2-4%甲醛的緩沖液或培養(yǎng)液進行細胞固定。經(jīng)驗證, 本染料MitoTracker® Red CM-H2XRos由含3.7%甲醛的*培養(yǎng)液于37℃孵育內(nèi)皮細胞15 min能起到良好的固定效果。
3)清洗細胞:吸除固定液,用適當緩沖液沖洗細胞數(shù)次。
4)細胞透化(可選):
像ICC等實驗需要細胞要做透化,則可將已固定的細胞直接加入含有去污劑如Triton X-100的緩沖液中孵育。透化結(jié)束后,用緩沖液清洗細胞即可進行后續(xù)ICC實驗。經(jīng)檢測,利用含0.2% Triton X-100的PBS孵育內(nèi)皮細胞10 min可以達到良好的透化效果。
另外,還可利用預(yù)冷的丙酮透化5 min,之后用PBS清洗細胞。經(jīng)驗證,即使后繼沒有進一步的抗體標記,丙酮透化處理也可降低背景信號。
注意事項
1)DMSO有毒,使用時請小心操作。
2)為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
3)本產(chǎn)品僅作科研用途!
HB211230