酶聯(lián)免疫斑點法通常用于評估抗原特異的T細胞的功效，即檢測IFN-γ的釋放。酶聯(lián)免疫斑點法是一種非常靈敏的免疫檢測方法，它可以在單細胞水平檢測細胞因子的分泌。酶聯(lián)免疫斑點法是靈敏的細胞檢測方法之一，它檢測的靈敏度可以達到1：100 000個細胞。依賴于化學物質的分析，酶聯(lián)免疫斑點分析可以比傳統(tǒng)的ELISA靈敏20到200倍。

（1）Mouse IFN-γ ELISpotkit（ALP）（Mabtech 3321-2A）

（2）Human IFN-γ ELISpotkit（ALP）（Mabtech 3420-2A）

注釋：以上的ELISpotKits可用性已經經過作者測試，用戶也可以用按自己的需要換別的替代。

（1）SIGMAFASTTM BCIP/NBT（Sigma B5655）

（3）倒掉培養(yǎng)基，并加入含有誘導物的細胞懸浮液。

一般要做如下幾組：不含誘導物的細胞、混有抗原（蛋白或多肽）的細胞和含PMA（10 ng/ml）和鈣離子載體Ionomycin（500 ng/ml）的細胞（陽性對照）。每個孔中的細胞數目決定于你的樣品中IFN釋放細胞的比例，通常是從2×104到2.5×105。如果靶細胞是多肽脈沖T2（T2pulsedwithpeptide）或瘤細胞，那么T細胞/靶細胞的比例需要滿足達到佳的檢測效果。

（8）把板放在黑暗中反應，直到有清楚的斑點顯示出來。