ERseeing ＜Endoplasmic Reticulum Green＞

對活細胞影響少，適用于長時間成像的ER染色試劑

本產品是活細胞成像用的不可逆ER染色試劑。與傳統(tǒng)的熒光標記Glibenclamide系ER染色試劑相比，對細胞功能的藥理作用小，由于其不可逆性，更換培養(yǎng)基后也可進行觀察。

※ 本產品是funakoshi基于京都大學工學研究科浜地格教授·田村朋則講師的研究成果商品化的產品。

※ 本產品僅供研究使用。

◆現(xiàn)有ER染色試劑的問題點以及ERseeing的優(yōu)勢

過去通用的ER染色試劑是將熒光染料附著于在ER中特異表達的K⁺ 通道拮抗劑Glibenclamide上，并廣泛用于ER的可視化。然而，由于以下的問題，應用范圍有限。

●  由于Glibenclamide的藥理效果，通道活性被抑制，對細胞的影響大。

●  由于是可逆的拮抗劑，因此通過培養(yǎng)基交換等的清洗操作非常容易去除。

與之相對的，ERseeing是一種新型ER染色試劑，具有與Rhodol綠色熒光染料相連的蛋白標記基團，對ER膜成分具有很高的親和力。通過選擇性地集中在ER上并用熒光基團標記ER蛋白，可以進行不可逆的染色。由于是不可逆的染色，染色后可更換含有FBS的培養(yǎng)基，因此可應用于任何的培養(yǎng)基和試劑處理環(huán)境下的長期成像。

◆原著論文

Fujisawa et al., J. Am. Chem. Soc., 140, 17060～17070 (2018). Chemical Profiling of the Endoplasmic Reticulum Proteome Using Designer Labeling Reagents.

◆特點

●  激發(fā)/熒光波長：509 nm/524 nm

    ※  可利用一般的綠色·色素FTIC的觀察條件

●  與傳統(tǒng)的熒光標記Glibenclamide系染色試劑相比，可以很好地抑制對細胞的影響。

●  即使培養(yǎng)基中含有ERseeing也可以進行觀察。

    ※  如果在培養(yǎng)基中長時間染色的話，或許會出現(xiàn)色素呈油滴狀聚集等非特異性染色的情況。若想提高特異性，建議清洗后再觀察。

●  由于是不可逆性染色，染色后可更換培養(yǎng)基。染色后可在含有FBS培養(yǎng)基等的任意培養(yǎng)基中成像。

●  活細胞染色后，也可固定后觀察。還可以與免疫染色法組合使用。

    ※  本試劑不適用于固定后細胞的染色。染色請使用活細胞。

◆應用實例

■  ERM的激發(fā)·熒光光譜

激發(fā)光譜（藍）和熒光光譜（綠）

※  適用于一般綠色熒光色素FTIC觀察條件

■  驗證ER特異性

通過與各種細胞器標記共染色評價本試劑的ER特異性。觀察到ERseeing（100 nM）與現(xiàn)有的Glibenclamide系ER染色試劑高度共定位（Pearson相關系數(shù)>0.9）。另一方面，未觀察到與溶酶體標記和線粒體標記的共定位。高爾基體標記觀察到部分共定位，可能是本試劑標記的蛋白通過高爾基體轉運，從ER轉移至分泌途徑。然而，添加ER-Golgi轉運抑制劑的話會減少與高爾基體的共定位。（詳情請參考原著論文）

■  評價細胞內滯留性

向無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)的HeLa細胞內添加ERseeing以及傳統(tǒng)的熒光標記Glibenclamide，染色15 min后進行觀察（左）。然后，更換含有10%FBS的培養(yǎng)基再次觀察。熒光標記Glibenclamide在清洗后熒光信號明顯消失了，但是由于ERseeing是不可逆染色的，清洗后也能觀察到很強的熒光信號。使用ERseeing進行ER染色后，可以在含F(xiàn)BS的培養(yǎng)基中培養(yǎng)并進行各種成像。

◆產品列表

?ERseeing ＜Endoplasmic Reticulum Green＞