產品背景：

1975年E.A. Carswell等人發(fā)現(xiàn)接種卡介苗的小鼠注射細菌脂多糖后，血清中出現(xiàn)一種能使多種腫瘤發(fā)生出血性壞死的物質，將其命名為腫瘤壞死因子（tumor necrosis factor，TNF)。八十年代人們發(fā)現(xiàn)其在消耗癥中起了重要作用，又稱惡液質素。TNF主要由活化的巨噬細胞，NK細胞及T淋巴細胞產生。1985年Shalaby把巨噬細胞產生的TNF命名為TNF-α，把T淋巴細胞產生的淋巴毒素（lymphotoxin，LT)命名為TNF-β。雖然TNF-α與TNF-β僅有約30%的同源性，但它們卻擁有共同的受體。TNF-α的生物學活性:占TNF總活性:的70 %～95 %，因此目前常說的TNF多指TNF-α。1984年TNF基因的克隆開辟了臨床試驗的時代，是第一個用于腫瘤生物療法的細胞因子，但因其缺少靶向性且有嚴重的副作用，目前僅用于局部治療。

產品特點：

更簡單：無需抗原抗體反應，基于小分子化學反應的檢測方法簡單高效，反應僅需要幾分鐘。

更靈敏：無需抗體，檢測染料僅BrdU抗體的1/500，很容易擴散，即便是單個增殖細胞也能準確檢測。

更快速：無需過夜，省卻了抗原抗體反應的復雜繁瑣步驟，完成整個檢測周期僅需2.5小時。

更準確：無需DNA變性(酸解、熱解、酶解等)，可有效避免變性帶來的樣品損傷，確保細胞核邊緣清晰完整。

更兼容：對樣品幾乎無損傷，更容易與多種抗體或熒光蛋白同時標記，能夠同時檢測細胞其他性狀特征

實驗步驟：

1.細胞培養(yǎng)

（以6孔板為參考，其他培養(yǎng)孔可根據(jù)實驗需要進行適當調整。）每孔1x10^5-3x10^6細胞接種于6孔板中，培養(yǎng)至正常生長階段。

注：細胞接種量，可根據(jù)細胞大小、生長速度、以及實驗處理周期等調整。

2.細胞干預或者處理

（選做）可以根據(jù)實驗需要對細胞進行藥物或者其他刺激干預處理。

3.細胞共孵育培養(yǎng)

根據(jù)預實驗結果，用細胞培養(yǎng)基按比例稀釋溶液，或者按比例在孔板培養(yǎng)液中加入適量的溶液與細胞共同孵育，同時設置不添加組作為陰性對照組。每孔加入配制的稀釋后的培養(yǎng)液共同孵育2h，去除舊培養(yǎng)液。

注意事項：

1.由于使用96孔板進行檢測，如果你的細胞要養(yǎng)48 h或更長，建議不要吝嗇96-孔板的四周邊孔，這32個邊孔不能使用，建議加入滅菌PBS以飽和中間64個孔的水分。因為細胞培養(yǎng)過程中，邊孔的水分蒸發(fā)很快，培養(yǎng)液及里面的藥物會出現(xiàn)濃縮現(xiàn)象，細胞的狀況就復雜了。

2.溶劑在低溫情況下會凝固，使用前請室溫放置或20-25℃水浴溫育片刻至全部融解后使用。

3.一般4oC避光保存兩周內有效，保存在-20度長期保存，避免反復凍融，小劑量分裝，用避光袋或是黑紙、錫箔紙包住避光以免分解，尤其當變?yōu)榛揖G色時就不能再用了。

4.Formazan溶解液結凍或產生沉淀時可以37℃水浴孵育以促進溶解，并且必須在全部溶解并混勻后使用。

5.孵育時，須避光。

6.有致癌性，用的時候小心，有條件帶那種透明的簿膜手套。配成的需要無菌，對菌很敏感。

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