本試劑盒采用凝膠反相酶譜法(Zymography)檢測MMP-2、MMP-9 活性及其無活性前體酶原譜系。Zymography 是一種廣為使用的、基于SDS-PAGE 電泳和反相凝膠染色的蛋白酶檢測方法，其靈敏度可達(dá)1 nM，高于ELISA方法，其基本原理和程序是：制備含有膠原酶底物的SDS-PAGE凝膠，含蛋白酶的樣

品在此凝膠中進(jìn)行電泳，電泳時(shí)SDS與樣本中的MMP可逆性結(jié)合，導(dǎo)致MMP氫鍵和疏水鍵破壞而不能發(fā)揮分解明膠的作用。電泳結(jié)束后取出凝膠與酶反應(yīng)Buffer孵育，MMP恢復(fù)活性，凝膠中由于含底物蛋白而被深染，形成深色背景，但在有蛋白酶條帶的位置，蛋白酶將降解凝膠中的底物蛋白，因而不被染色

而形成透亮區(qū)域，從而能同時(shí)指示MMP-2、MMP-9 的大小位置(酶譜)及活性。本試劑盒提供MMP-2、MMP-9特異蛋白底物及酶學(xué)反應(yīng)緩沖液，可檢測少至0.1~0.5 μl 血液中的MMP-2、MMP-9 酶譜及活性，檢測靈敏度~1nM。試劑盒可進(jìn)行25-50次標(biāo)準(zhǔn)小膠檢測（如果樣本MMP含量高，孵育時(shí)間短，不用換液可最多50次），如果小膠加樣孔為10~15個(gè)，則總計(jì)可最多檢測500~750個(gè)樣品。

檢測目的:

本試劑盒用于檢測組織、細(xì)胞中MMP-2、MMP-9 酶譜活性及其前體酶原酶譜。

MMP-2-MMP-9 明膠酶譜法檢測試劑盒說明：

1. 10 mM EDTA能夠完-全抑制MMP活性。

2. 凝膠干燥：可使用聚丙烯酰胺凝膠干膠裝置室溫快速干燥凝膠，作為永-久記錄保留。

3. 本試劑盒僅供科研實(shí)驗(yàn)使用，不得用于食用、臨床醫(yī)療等其它用途。

4.實(shí)驗(yàn)操作中，請穿戴好實(shí)驗(yàn)服、防護(hù)口罩和一次性實(shí)驗(yàn)手套，避免直接接觸。嚴(yán)禁入口。

MMP-2-MMP-9 明膠酶譜法檢測試劑盒染色步驟：

1. 此染色液即為工作液，使用時(shí)直接將聚丙烯酰胺凝膠放在培養(yǎng)皿中以考馬斯亮藍(lán)染色液覆蓋凝

膠，并緩慢搖動2h；

2. 傾去染色液，用脫色液沖洗凝膠；

3. 以脫色液覆蓋凝膠，緩慢搖動2h，傾去脫色液，再加入新脫色液進(jìn)行脫色，直至出現(xiàn)透亮區(qū)域，此透亮

區(qū)域?yàn)?MMP 條帶的位置。（通常此過程需要 2～4h，也可脫色過夜至出現(xiàn)清晰透亮條帶和干凈的背景）；

4. 對凝膠進(jìn)行分析和照相，凝膠可放置在7％的乙酸中保存。也可用凝膠干膠裝置對凝膠進(jìn)行處理后保存。

說明：

A. 染色液含有甲醇，呈酸性，具有輕微腐蝕性，請穿戴好實(shí)驗(yàn)服和一次性實(shí)驗(yàn)手套，不要直接接觸。

嚴(yán)禁入口。使用完成后，請密封保存；

B. 脫色液配方：冰醋酸:甲醇:水＝7:5:88（V:V:V）；

C. 保存液：7％冰醋酸；

D. 凝膠染色之后，染色液可以回收利用，裝入新容器內(nèi)，4oC保存，可反復(fù)使用2-3次。