■ 細(xì)胞培養(yǎng)液/尿液外泌體提取試劑盒產(chǎn)品簡(jiǎn)介：
Exosome（外泌體）是活細(xì)胞分泌的直徑約為30-150nm間的膜性囊泡，其天然存在于生物的體液中，包括血液、尿液、唾液、腦脊液、乳液等。Exosome中攜帶有細(xì)胞溶質(zhì)蛋白、smRNA、各種代謝酶等，參與各種細(xì)胞功能調(diào)控，有望成為多種疾病的早期診斷標(biāo)志物。近期的研究發(fā)現(xiàn)外泌體還可以運(yùn)輸核酸，參與細(xì)胞間通訊，參與細(xì)胞間的物質(zhì)交換和信息交流，影響細(xì)胞的生理狀態(tài)，并與多種疾病的發(fā)生與進(jìn)程密切相關(guān)。Exosome在藥物載體運(yùn)輸，腫瘤生物學(xué)和基因調(diào)控研究等方向已經(jīng)成為研究熱點(diǎn)。
Exosome Isolation Regent用于高效、快速、方便的從血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、尿液、組織液中體取exosome的試劑盒。僅需通過(guò)簡(jiǎn)單操作和常規(guī)離心機(jī)即可從樣本內(nèi)中獲取大量結(jié)構(gòu)完整的exosome。相比傳統(tǒng)的超速離心法，Exosome Isolation Regent提取效率更高，更節(jié)省時(shí)間和樣本，提取的exosome可用于Western Bloting、qPCR、功能驗(yàn)證、Elisa等后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

■細(xì)胞培養(yǎng)液/尿液外泌體提取試劑盒試劑盒適用范圍：
本試劑盒只適用于細(xì)胞培養(yǎng)液或尿液的外泌體提取，僅用于科學(xué)研究。

■試劑組分：


■細(xì)胞培養(yǎng)液/尿液外泌體提取試劑盒保存條件：
請(qǐng)于4°C保存，可穩(wěn)定保存一年。（可常溫運(yùn)輸）

■流程介紹：
樣品預(yù)處理→沉淀外泌體→外泌體重懸→外泌體純化

■細(xì)胞培養(yǎng)液/尿液外泌體提取試劑盒樣品準(zhǔn)備：
組織液：
1收集樣品后置于冰上，2000g離心10 min，以除去殘留細(xì)胞；
2 收集上清液，10000g離心10 min，以除去細(xì)胞碎片；
3 收集上清液提取exosome或4°C保存。
注：如需進(jìn)行下游核酸（DNA或RNA）相關(guān)實(shí)驗(yàn)，建議樣品量不低于300 μl；如樣品是組織沖洗液，建議樣品量不低于2 ml，或采用100KD超濾管濃縮后進(jìn)行外泌體提取實(shí)驗(yàn)。

■ Exosomes提取：
（1）取300 μl上清液至新的離心管中，加入體積比為1：1(V樣：VA=1：1)的Exosome Isolation Regent A液；
（2）顛倒混勻3-5次后于4°C靜置5 min后 10000g 離心2 min；
（3）取上清液轉(zhuǎn)移置新的離心管中，加入體積比為1：1的Exosome Isolation Regent B液；
（4）顛倒混勻3-5次后于4°C靜置1h-2h后 13500 g 離心30 min后棄去上清液；收集沉淀，此沉淀即為外泌體；
（5）根據(jù)后續(xù)實(shí)驗(yàn)加入100-200µl Exosome Isolation Regent C重懸沉淀物，進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)或-80°C保存（由于沉淀物具有一定的粘性，因此加入Exosome Isolation Regent C后室溫放置約15 min，用移液器吹打后沉淀物會(huì)自然溶解）。
注意：如對(duì)提取效率有要求，可適時(shí)延長(zhǎng)離心時(shí)間10-30 min，但建議離心總時(shí)長(zhǎng)不超過(guò)1h。

■ 組織液外泌體提取試劑盒常見(jiàn)問(wèn)題：
Q1：提取的外泌體如何保存？
A1：外泌體可在2-8℃保存一周，若需長(zhǎng)時(shí)間保存，建議放置于-80℃冰箱凍存，避免反復(fù)凍融。
Q2：如何鑒定提取的外泌體？
A2：外泌體是體細(xì)胞分泌的細(xì)胞外囊泡群體中一種，直徑一般為30-150nm，通常確定外泌體一般需要三個(gè)條件：透射電鏡（TEM）形態(tài)觀察，顆粒粒徑測(cè)定（NTA）和蛋白標(biāo)志物檢測(cè)（外泌體標(biāo)志蛋白有CD9、CD81、CD63、Alix、TSG101 等）。
Q3：將Exosome Isolation Reagent加入到體液樣本中后，顛倒混合。請(qǐng)問(wèn)這一步是否可以用振蕩器劇烈震會(huì)對(duì)效果有影響？
A3：只需將Exosome Isolation與待提取樣品混合均勻即可，震蕩的強(qiáng)度不宜過(guò)分劇烈，劇烈震蕩會(huì)影響提取效果。
Q4：與超速離心方法相比本試劑盒提取外泌體方法有哪些優(yōu)勢(shì)？
A4：本試劑盒具有操作簡(jiǎn)單，便捷，提取效率高，可達(dá)90%以上，不需要額外儀器設(shè)備，可小體積樣本提取等特點(diǎn)。