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馬松(Masson)三色染色病理服務(wù)
- 公司名稱 北京嘉美臻元生物技術(shù)有限公司
- 品牌
- 型號
- 產(chǎn)地
- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)廠家
- 更新時(shí)間 2019/3/20 15:41:27
- 訪問次數(shù) 7990
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產(chǎn)地類別 | 進(jìn)口 |
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馬松(Masson)三色染色病理服務(wù)
一、馬松(Masson)三色染色簡介
馬松(Masson)三色染色是結(jié)締組織染色中經(jīng)典的一種方法,是膠原纖維染色而經(jīng)典的技術(shù)方法。三色染色通常是指染胞核和能選擇性的顯示膠原纖維和肌纖維。該法染色原理不陰離子染料分子的大小和組織的滲透有關(guān):分子的大小由分子量來體現(xiàn),小分子量易穿透結(jié)構(gòu)致密、滲透性低的組織;而大分子量則只能進(jìn)入結(jié)構(gòu)疏松的、滲透性高的組織。
二、染色步驟
1、石蠟切片脫蠟至水
2、鉻化處理或去汞鹽沉淀(甲醛固定的組織此步可略)
3、依次自來水和蒸餾水洗
4、用Regaud蘇木精染液或Weigert蘇木精液染核5-10min
5、充分水洗,如過染可鹽酸酒精分化
6、蒸餾水洗
7、用Masson 麗春紅酸性復(fù)紅液5-10min。
8、以2%冰醋酸水溶液浸洗片刻
9、1%磷鉬酸水溶液分化3-5min
10、不經(jīng)水洗,直接用苯胺藍(lán)或光綠液染5min
11、以0.2%冰醋酸水溶液浸洗片刻
12、95%酒精、*、二甲苯透明、中性樹膠封固
13、結(jié)果:膠原纖維、粘液、軟骨呈藍(lán)色(如光綠液染色為綠色),胞漿、肌肉、纖維素、神經(jīng)膠質(zhì)呈紅色,胞核黑藍(lán)色
三、樣本說明
1、石蠟切片
取材:1、組織離體后需及時(shí)固定;2、組織標(biāo)本不宜過大、過厚。
固定:1、固定液:10%福爾馬林(4%多聚甲醛)或10%中性甲醛;2、用量:一般固定液的量與組織體積比為10:1~20:1;3、固定:適宜的固定時(shí)間,主要根據(jù)材料的大小、松密程度及固定液的穿透速度而定。
保存:切片經(jīng)60℃烤片3-5小時(shí)后,可于常溫或4℃干燥保存。
2、冰凍切片
取材:取材后需立即置于超低溫冰箱或液氮中保存。
固定:樣本冰凍切片后,應(yīng)立即放入甲醇、丙酮、95%酒精、4%多聚甲醛等固定液中固定。
保存:固定好的切片自然風(fēng)干,密封后置于-80℃、-20℃保存,盡快用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
3、細(xì)胞塊石蠟切片
細(xì)胞量較多的樣品,可離心分離所需細(xì)胞,用中性甲醛固定后制作成瓊脂細(xì)胞塊,然后按照制作石蠟切片的操作流程進(jìn)行切片。
4、細(xì)胞爬片
在孔板里做的細(xì)胞爬片,爬片取出后,用PBS洗滌2次(根據(jù)研究目的,PBS洗滌可選擇不做),用4%多聚甲醛4℃固定15分鐘,將表面液體吹干,置于-20℃保存。若在短時(shí)間內(nèi)即開展實(shí)驗(yàn),可在加固定液后,于4℃冰箱中放置一段時(shí)間。
5、細(xì)胞涂片
細(xì)胞涂片常用的固定液有95%酒精(為常用)、酒精-冰醋酸液、Ethyl ether-酒精液和Carney’s液等。
四、注意事項(xiàng)
1、常用的固定液為中性甲醛和4%多聚甲醛,能使大多數(shù)抗原保存良好。
2、病理實(shí)驗(yàn)切片Best是防脫片,以免實(shí)驗(yàn)過程中出現(xiàn)掉片。若客戶提供切片,應(yīng)告知切片有無防脫處理。
3、骨組織、皮膚組織或脂肪含量較高的樣本,實(shí)驗(yàn)過程中有較高的掉片幾率。
4、客戶可提供組織塊(以10%福爾馬林、4%多聚甲醛或10%中性甲醛固定,如組織塊極小請事先說明)、蠟塊或切片(使用免疫組化切片,以避免實(shí)驗(yàn)過程中掉片)
5、待檢測蛋白的種屬、實(shí)驗(yàn)分組情況及實(shí)驗(yàn)背景資料、其他具體要求等需事先說明。
6、若客戶提供骨組織或鈣化程度較高的組織進(jìn)行實(shí)驗(yàn),需進(jìn)行脫鈣處理。
7、浸泡在固定液中的組織樣本,在運(yùn)輸中容器需密封,防止破碎、滲漏。
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