蘇木素伊紅(HE)染色
- 公司名稱 北京嘉美臻元生物技術(shù)有限公司
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- 型號
- 產(chǎn)地
- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)廠家
- 更新時間 2019/3/20 15:36:27
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產(chǎn)地類別 | 進口 |
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蘇木素伊紅(HE)染色
腸 肺 胃
一、蘇木素伊紅(HE)染色簡介
蘇木素-伊紅染色,簡稱HE染色,是組織學(xué)技術(shù)的常規(guī)染色方法。蘇木素為堿性天然染料,可使細胞核著色。伊紅是一種化學(xué)合成的酸性染料,在一定條件下可使細胞漿著色。
二、染色步驟
1、脫蠟至水
2、蘇木素染液5-10min
3、浸水沖洗10min
4、蒸餾水洗滌數(shù)秒
5、95%乙醇5s
6、伊紅染液30s-2min
7、脫水、透明、封片或進行其他染色
三、樣本說明
1、石蠟切片
取材:1、組織離體后需及時固定;2、組織標(biāo)本不宜過大、過厚。
固定:1、固定液:10%福爾馬林(4%多聚甲醛)或10%中性甲醛;2、用量:一般固定液的量與組織體積比為10:1~20:1;3、固定:適宜的固定時間,主要根據(jù)材料的大小、松密程度及固定液的穿透速度而定。
保存:切片經(jīng)60℃烤片3-5小時后,可于常溫或4℃干燥保存。
2、冰凍切片
取材:取材后需立即置于超低溫冰箱或液氮中保存。
固定:樣本冰凍切片后,應(yīng)立即放入甲醇、丙酮、95%酒精、4%多聚甲醛等固定液中固定。
保存:固定好的切片自然風(fēng)干,密封后置于-80℃、-20℃保存,盡快用于后續(xù)實驗。
3、細胞塊石蠟切片
細胞量較多的樣品,可離心分離所需細胞,用中性甲醛固定后制作成瓊脂細胞塊,然后按照制作石蠟切片的操作流程進行切片。
4、細胞爬片
在孔板里做的細胞爬片,爬片取出后,用PBS洗滌2次(根據(jù)研究目的,PBS洗滌可選擇不做),用4%多聚甲醛4℃固定15分鐘,將表面液體吹干,置于-20℃保存。若在短時間內(nèi)即開展實驗,可在加固定液后,于4℃冰箱中放置一段時間。
5、細胞涂片
細胞涂片常用的固定液有95%酒精(為常用)、酒精-冰醋酸液、Ethyl ether-酒精液和Carney’s液等。
四、注意事項
1、常用的固定液為中性甲醛和4%多聚甲醛,能使大多數(shù)抗原保存良好,適用于免疫組織化學(xué)。
2、病理實驗切片Best是防脫片,以免實驗過程中出現(xiàn)掉片。若客戶提供切片,應(yīng)告知切片有無防脫處理。
3、骨組織、皮膚組織或脂肪含量較高的樣本,實驗過程中有較高的掉片幾率。
4、客戶可提供組織塊(以10%福爾馬林、4%多聚甲醛或10%中性甲醛固定,如組織塊極小請事先說明)、蠟塊或切片(使用免疫組化切片,以避免實驗過程中掉片)
5、待檢測蛋白的種屬、實驗分組情況及實驗背景資料、其他具體要求等需事先說明。
6、若客戶提供骨組織或鈣化程度較高的組織進行實驗,需進行脫鈣處理。
7、浸泡在固定液中的組織樣本,在運輸中容器需密封,防止破碎、滲漏。