透射電鏡(TEM)檢測服務(wù)
- 公司名稱 北京嘉美臻元生物技術(shù)有限公司
- 品牌
- 型號
- 產(chǎn)地
- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)廠家
- 更新時間 2019/3/19 16:40:42
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產(chǎn)地類別 | 進口 |
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透射電鏡(TEM)檢測服務(wù)
一、實驗技術(shù)簡介
透射電鏡,即透射電子顯微鏡(Transmission Electron Microscope,簡稱TEM),通常稱作電子顯微鏡或電鏡(EM),是使用較為廣泛的一類電鏡。結(jié)構(gòu)的研究從尺度方面可以分為宏觀研究和微觀研究,而生命科學(xué)的研究主要集中在微觀方面,從個體水平到分子水平的研究分辨率在0.2mm以上可以用用肉眼觀察,分辨率在0.2mm-0.2um之間可以用光鏡觀察,分辨率在0.2um-0.2nm之間就一定要用電子顯微鏡(簡稱電鏡)技術(shù),而細胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)及相關(guān)細胞器多數(shù)在0.2um-0.2nm之間,所以這個尺度又稱為亞細胞結(jié)構(gòu),而細胞結(jié)構(gòu)的變化主要表現(xiàn)在亞細胞水平,這種變化與之對應(yīng)的功能變化也敏感,所以生命科學(xué)的很多問題都集中在這個尺度范圍內(nèi),那么電鏡就成為這個尺度研究的主要工具。
實驗技術(shù)原理:由照明部分提供的有一定孔徑角和強度的電子束平行地投影到處于物鏡物平面處的樣品上,通過樣品和物鏡的電子束在物鏡后焦面上形成衍射振幅*值,即*幅衍射譜。這些衍射束在物鏡的象平面上相互干涉形成*幅反映試樣為微區(qū)特征的電子圖象。通過聚焦(調(diào)節(jié)物鏡激磁電流),使物鏡的象平面與中間鏡的物平面相*,中間鏡的象平面與投影鏡的物平面相*,投影鏡的象平面與熒光屏相*,這樣在熒光屏上就察觀到一幅經(jīng)物鏡、中間鏡和投影鏡放大后有一定襯度和放大倍數(shù)的電子圖象。由于試樣各微區(qū)的厚度、原子序數(shù)、晶體結(jié)構(gòu)或晶體取向不同,通過試樣和物鏡的電子束強度產(chǎn)生差異,因而在熒光屏上顯現(xiàn)出由暗亮差別所反映出的試樣微區(qū)特征的顯微電子圖象。
二、實驗操作流程
1、取材:組織塊小于1立方毫米
2、固定
3、脫水
4、包埋
5、超薄切片機切片70nm
6、3%醋酸鈾-枸櫞酸鉛雙染色
7、透射電鏡觀察,拍片
三、實驗注意事項
1、客戶提供
1)細胞,數(shù)量要求:10^6次方以上。生長在培養(yǎng)皿或培養(yǎng)板上細胞取材,若是懸浮的細胞將細胞轉(zhuǎn)移到尖底 EP管里直接離心,貼壁細胞就先倒出培養(yǎng)液,用胰蛋白酶消化或用細胞刮刮下,而后帶培養(yǎng)液一起低速離心,800-1200 轉(zhuǎn)/分鐘,離心 5-10 分鐘使細胞沉淀成團,離心完后倒出培養(yǎng)液,沿壁緩慢加入電鏡固定液(1.5%-2.5%中性戊二醛),注意不要把細胞團打散。4℃下固定 15 分鐘或以上再送檢。若細胞團太小,注意要用1ml 甚至 0.5ml 尖底 EP 管來進行固定、保存。
2)肌肉:觀察縱切面時沿著肌束方向,用鋒利的刀片或剪刀在取出的組織一邊取出 1-3 條細長的肌束,橫截面約 1mm*1mm,投入到 2-8℃的電鏡固定液(2.5%中性戊二醛)里。若有條件,為防止肌肉收縮變形,可將取出的肌束貼在載玻片毛玻璃一側(cè),使其略微伸展。再將貼好標本的載玻片放入戊二醛中進行固定。若無,則可取出長條狀組織后,垂直緩慢放入固定液中,懸空在固定液里稍等 3 秒再放入。
3)植物、昆蟲等密度比固定液低的樣品:必須先用針筒或抽真空儀器先抽氣,再使標本沉入固定液中。
2、交付標準:
1)掃描照片、讀片分析
2)完整項目報告(材料、試劑、儀器、方法、數(shù)據(jù)分析、實驗結(jié)果)
3、其他
1)組織從生物活體取下來以后,需要立即處理,否則由于細胞內(nèi)部的各種酶的作用,出現(xiàn)細胞自溶現(xiàn)象,還有可能被污染,所以必須做到快,小,準,冷(0-4攝氏度)。
2)超薄切片的切片面積大不能超過0.5mm×0.3mm,比較難切的植物樣品要求切片面積更小。
3)檬酸鉛染液極易和空氣中的二氧化碳反應(yīng)形成不溶解的黑色顆粒,污染切片。檸檬酸鉛染液一定要現(xiàn)用相配,所用的雙蒸水一定要煮沸除去二氧化。