產(chǎn)品信息

DeltaVision Elite高分辨活細(xì)胞成像系統(tǒng) 高分辨率活細(xì)胞成像系統(tǒng)是用于活細(xì)胞長(zhǎng)時(shí)間、高清晰度、高靈敏度成像的設(shè)備。

●更高的靈敏度 

●更少的光損傷和光淬滅

●更快的速度——高可達(dá)300fps的成像速度

●高度均一的光學(xué)系統(tǒng) 

●InsightSSI ™ 固態(tài)照明光源

●3D 還原型反卷積 

●NanoMotion ™ 全自動(dòng)3D 載物臺(tái)

DeltaVision |DV Elite活細(xì)胞成像工作站

2014-09-30 15:12 宋鵬

DeltaVision Elite高分辨活細(xì)胞成像系統(tǒng)活細(xì)胞工作站原理

快速去卷積(deconvolution)技術(shù)

    當(dāng)一個(gè)點(diǎn)光源經(jīng)過顯微鏡的光路，由于鏡片對(duì)光線的衍射和散射，終呈現(xiàn)在觀察者面前的是一個(gè)模糊的點(diǎn)，所以點(diǎn)光源變成模糊的點(diǎn)的過程即為卷積。去卷積就是把模糊的點(diǎn)還原成點(diǎn)光源的過程。

    三維寬場(chǎng)去卷積成像技術(shù)是應(yīng)用光學(xué)切片方法獲取三維標(biāo)本的二維圖像序列,然后通過去卷積圖像處理方法進(jìn)行圖像恢復(fù),進(jìn)而進(jìn)行三維重建的一種以光學(xué)技術(shù)和圖像處理技術(shù)為核心的顯微成像方法。如下圖：

    與共聚焦顯微鏡所采用的方法不同,寬場(chǎng)去卷積技術(shù)不使用共焦針孔,因此能將所有物鏡搜集到的熒光信號(hào)全部送到高靈敏度的相機(jī)中形成圖像。

    通過將非焦平面的光線還原至焦平面上，大大提高了樣品信號(hào)強(qiáng)度以及圖像的信噪比。

活細(xì)胞工作站適用范圍

1、活細(xì)胞樣品觀察

活細(xì)胞工作站通過細(xì)胞培養(yǎng)裝置提供適宜細(xì)胞生長(zhǎng)的溫度、氣體環(huán)境來(lái)保證活細(xì)胞樣品的長(zhǎng)時(shí)間存活，可用于觀察：

1）細(xì)胞分裂與細(xì)胞周期

2）細(xì)胞遷移與細(xì)胞運(yùn)動(dòng)

3）細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)

4）鈣離子信號(hào)研究

5）宿主與病原體相互作用

6）其它活細(xì)胞樣品觀察

2、固定樣品觀察

    活細(xì)胞工作站采用的去卷積技術(shù)能夠很好的保證微弱信號(hào)（易淬滅）、細(xì)微結(jié)構(gòu)樣品的圖像質(zhì)量，同時(shí)采用的固態(tài)冷光源對(duì)于細(xì)胞的損傷較小，因此活細(xì)胞工作站不僅能夠觀察普通固定熒光樣品，同時(shí)對(duì)于微弱信號(hào)（易淬滅）、細(xì)微結(jié)構(gòu)的固定樣品也有很好的觀察效果。

活細(xì)胞工作站操作流程

開始使用顯微鏡工作之前，請(qǐng)先確認(rèn)：

ü 控制器、電源、相機(jī)處于關(guān)閉狀態(tài)（根據(jù)指示燈或風(fēng)扇判斷）；

ü 載物臺(tái)上不應(yīng)有任何載玻片或培養(yǎng)皿；

ü 物鏡應(yīng)降到低位置，表面鏡油已清除，查看當(dāng)前所使用物鏡的放大倍數(shù)；

開機(jī)及初始化步驟

1. 按一下電腦開關(guān)以及控制器開關(guān)，電腦開關(guān)指示燈為藍(lán)色，控制器指示燈為黃色；

2. 等待電腦啟動(dòng)，以用戶名worx登錄，密碼為cn71709；等待小控制面板上的指示燈變?yōu)榧t色；

3. 打開電腦桌面上的“startsoftWoRx”，點(diǎn)擊File | Acquire (Resolve3D)，確認(rèn)物鏡已降到低位置，在彈出窗口上點(diǎn)擊Initialize開始初始化；

4. 初始化完成后，出現(xiàn)Resolve3D、Data Collection、Filter Monitor三個(gè)窗口，系統(tǒng)啟動(dòng)完成。

（注：如果需要進(jìn)行長(zhǎng)時(shí)間的活細(xì)胞觀察，請(qǐng)?jiān)趯?shí)驗(yàn)開始前至少1個(gè)小時(shí)打開溫度控制器加熱開關(guān)，對(duì)顯微鏡和樣品進(jìn)行預(yù)熱，使其達(dá)到觀測(cè)狀態(tài)）

觀察及拍攝步驟

1. 目鏡下找到觀察目標(biāo)；

2. 選擇好需要拍攝視野（可同時(shí)選擇多點(diǎn)）；

3. 選擇好熒光通道及熒光強(qiáng)度曝光時(shí)間等；

4. 選擇Z軸拍攝層數(shù)、拍攝總時(shí)長(zhǎng)、拍攝時(shí)間間隔、確認(rèn)熒光通道；

5. 設(shè)置文件保存位置及文件名；

6. 開始拍攝。

（注：如長(zhǎng)時(shí)間活細(xì)胞觀察，建議實(shí)驗(yàn)開始前1小時(shí)觀察氣體供應(yīng)量及溫度，確定實(shí)驗(yàn)穩(wěn)定開始后離開）

關(guān)機(jī)順序

1. 取下樣品，清除物鏡上的鏡油，把物鏡降到低位置。

2. 退出Resolve3D程序，關(guān)閉工作站PC和顯示器（如果當(dāng)日不再使用）；

3. 按一下控制器開關(guān)關(guān)閉控制器，等待小控制面板燈由紅變綠，后燈滅；

4. 確認(rèn)電腦和控制器都關(guān)閉后，關(guān)閉總開關(guān)。

活細(xì)胞工作站注意事項(xiàng)

樣品制備注意事項(xiàng)

1. 活細(xì)胞實(shí)驗(yàn)提前購(gòu)買培養(yǎng)皿；

2. 固定樣品盡量使用0.17mm厚度蓋玻片；

3. 根據(jù)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)選擇細(xì)胞密度（如需觀察細(xì)胞分裂，細(xì)胞不能太密，如需觀察細(xì)胞遷移，細(xì)胞不能太?。?/span>

4. 懸浮細(xì)胞*提前處理，例如使用poly-lysine或相似物質(zhì)的玻璃底的培養(yǎng)皿；

5. 活細(xì)胞觀察前使細(xì)胞處于生理狀態(tài)；

6. 了解細(xì)胞對(duì)于溫度、氣體、PH值等的需要；

7. 熒光素的選擇，活細(xì)胞工作站有三套濾光片，如選擇多通道觀察熒光時(shí)，不同濾光片不能同時(shí)觀察，濾光片具體情況如下圖：

Standard：DAPI, FITC, TRITC, CY5

Live cell：CFP, GFP, YFP, mCherry

Alexa：DAPI, FITC, A594, CY5

物鏡相關(guān)注意事項(xiàng)

1. 在實(shí)驗(yàn)過程中如需切換物鏡，務(wù)必先把物鏡降到低位置，防止鏡頭與載物臺(tái)發(fā)生碰撞；

2. 請(qǐng)注意區(qū)分油鏡（100X、60X）和空氣鏡（40x、20X、10X）。如需從油鏡切換到空氣鏡，請(qǐng)先將蓋玻片上的鏡油擦凈，防止污染空氣鏡鏡頭；

3. 確認(rèn)Resolve3D | Lens選項(xiàng)中已選擇的物鏡與當(dāng)前所使用的物鏡相同；

4. 選擇合適的鏡油，在物鏡和蓋玻片上各滴一小滴。切勿使玻璃棒接觸到鏡頭表面，以防滑傷鏡頭；玻璃棒也不要接觸蓋玻片，防止沾上灰塵或熒光染料進(jìn)而污染鏡油；

5. 務(wù)必嚴(yán)格控制鏡油的滴入量。過多的鏡油會(huì)流入鏡頭，造成物鏡內(nèi)部光學(xué)元件污染；

6. 滴好鏡油后須及時(shí)蓋上瓶蓋并擰緊，放回原位，防止鏡油被污染；

7. 當(dāng)您的實(shí)驗(yàn)完成后，請(qǐng)及時(shí)清除鏡頭上的鏡油。先使用擦鏡紙輕輕擦去鏡頭表面鏡油，再用棉簽蘸取擦鏡液輕輕擦掉鏡頭玻璃表面的鏡油，切勿用力來(lái)回擦拭，以防滑傷鏡頭。棉簽或鏡頭紙不能重復(fù)使用，必須注意保存，防止落入灰塵；

8. 工程師會(huì)定期對(duì)物鏡進(jìn)行全面的清潔維護(hù)。所以，您只需要把鏡頭表面的鏡油清除，不影響下次使用即可，切勿過度擦拭；

9. 如果鏡油難以清除，或有鏡油流到物鏡臺(tái)或載物臺(tái)上，請(qǐng)立即通知工程師。

一般性事項(xiàng)

1. 每次使用顯微鏡前后請(qǐng)?jiān)凇秲x器使用日志》上登記；

2. 請(qǐng)注意保持顯微鏡室的潔凈，注意防塵；

3. 顯微鏡屬貴重儀器，請(qǐng)嚴(yán)格按照操作規(guī)程合理使用，愛護(hù)顯微鏡。

常見故障排查

問題1、視野下一邊亮一邊暗：檢查物鏡、EP轉(zhuǎn)輪是否轉(zhuǎn)到位；

問題2、熒光燈亮，但鏡下黑暗：排除樣品本身問題后，查看二分鏡是否旋到對(duì)應(yīng)數(shù)字（見附表）；

問題3、小控制面板操作失靈：重啟控制面板，長(zhǎng)按控制面板電源（機(jī)柜中黃色圓圈）關(guān)閉，等待30秒后開啟控制器電源，等紅燈亮起后重新打開軟件進(jìn)行初始化（注意鏡頭降到低位）；

問題4、鏡下觀察中間亮四周暗：打開軟件Resolve3D窗口下的“setting”，點(diǎn)擊“illumination”標(biāo)簽，左右拖動(dòng)“Field Stop Aperture”右側(cè)拖條，聽到顯微鏡會(huì)隨著拖動(dòng)發(fā)出聲響，后調(diào)到右側(cè)，顯示數(shù)字100即可。