NanoPro 1000 超微量蛋白磷酸化分析系統(tǒng)

在細胞生物學功能研究中，有許多常規(guī)的研究手段,如流式,生物質譜,雙向電泳,蛋白芯片等技術。隨著研究的深入，科學家們特別需求進行真正意義上的高靈敏,高精度研究手段，力求通過一次實驗，快速發(fā)現更多的信息：鑒定結果更為可信，靈敏度更加提高來鑒定更多低豐度蛋白，更多的修飾信息，結構信息等。傳統(tǒng)分析技術具有很多局限性,如雙向凝膠電泳(2DE),對疏水性蛋白、堿性蛋白、特別是低豐度蛋白等無能為力，成為蛋白質組研究的瓶頸;而質譜分析技術也是由于靈敏度等問題,需要大量的樣品等原因,十幾年來一直對研究低豐度調控蛋白缺乏信心.

相同的Western, 不同的生物學實驗結果

另外, 傳統(tǒng)蛋白分析技術所用的蛋白量需來自成千上萬個細胞。所得結果分辨率及重復性不理想。各種蛋白分析法所需樣品量如下：

1.質譜儀樣品量100000 個細胞
2.細胞儀樣品量：10000 個細胞
3蛋白電泳，樣品量：5000 個細胞
4.蛋白芯片樣品量：1000個細胞

ProteinSimple公司的NanoPro 1000 超微量蛋白磷酸化分析系統(tǒng)為蛋白功能和信號通路研究提供了一個全新的研究方案。傳統(tǒng)的蛋白研究方法需要成千上萬的細胞，而NanoPro 1000系統(tǒng)每次分析僅需要25個細胞。
并可對超微量珍貴樣品的信號轉導蛋白之特性直接檢測，適用各種樣品包括：
1.原代細胞
2.FACS 分選細胞
3.穿刺抽取之腫瘤細胞
4.顯微切片組織細胞
5.分離的干細胞群

系統(tǒng)利用毛細管樣品定位及分析技術,結合毛細管分離及化學發(fā)光檢測原理進行納米級的自動化實驗，避免了人為操作誤差，有效提高檢測結果的精確性和重復性。過去蛋白檢測儀無法檢測到的信息，如細胞內控制通路的調控信息，可由此精確測得。
技術被用來分析信號轉導過程中所涉及的蛋白構象上的極細微變化。Nano1000為結構緊湊的臺式分析系統(tǒng)。
從新的角度分析蛋白調控機制，Nano技術采用等電點電泳的方法將不同構象的蛋白分離。該方法大大推進了多個領域的研究，包括：
藥物開發(fā)-篩選激酶抑制劑藥物的作用靶點
生物標記物的發(fā)現和確認-觀察疾病引起的蛋白構象的細微變化，研究其發(fā)病機制
腫瘤蛋白活性-研究組織和細胞中腫瘤蛋白的調控機制翻譯后修飾的研究-檢測蛋白構象改變引起的等電點極細微的變化

1000將蛋白分離與檢測技術相結合:
將毛細管等電點電泳和化學發(fā)光免疫測定這兩種常用的蛋白檢測技術相結合。等電點電泳可將不同構象的蛋白分離。分離后蛋白被儀器固定在毛細管壁上，接著用化學發(fā)光免疫的方法檢測蛋白。這為信號轉導蛋白的檢測提供了新的視角。


【操作流程】
1.上樣
每個毛細管中加400nl樣本混合物，包括樣本、熒光標記PI和兩性電解質。
2.分離
毛細管兩端加電壓，樣本中的蛋白質隨著自身等電點的不同，加以分離。
3.固定
毛細管在紫外光照射下，其毛細管壁上的‘化學物質被激活，從而將分離的蛋白異構體固定在毛細管壁上。
4.免疫標記
用洗脫液將非特異結合的蛋白質洗脫，將固定的蛋白質進行免疫反應，加入發(fā)光催化劑誘導其化學發(fā)光，發(fā)光信號被CCD攝像機拍攝下來。
5.結果分析
通過專業(yè)的軟件，對結果進行定量分析