細(xì)胞名稱  恒河猴腎細(xì)胞；LLC-MK2培養(yǎng)
形態(tài)特性 上皮細(xì)胞

品牌 貼壁生長

特征特性 LLC-MK2細(xì)胞株源自六只成年綠猴的腎細(xì)胞懸液。 據(jù)報(bào)道這個細(xì)胞對很多病毒敏感，包括腸道病毒、鼻病毒、粘病毒和痘病毒家族中的成員。

培養(yǎng)條件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%

傳代方法 消化3-5分鐘。1：

2。3天內(nèi)可長滿。  

傳代情況 PN5

凍存條件 *培養(yǎng)基+8%DMSO

支原體檢測 陰性　

STR

同工酶

染色體

使用權(quán)限 A類

恒河猴腎細(xì)胞；LLC-MK2培養(yǎng)貼壁細(xì)胞: 對于貼壁細(xì)胞應(yīng)先吸(倒)盡培養(yǎng)基，吸的越干凈越好，以免中和后加入的消化液，使強(qiáng)度減弱（或PBS洗1－3次）。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml，按此比例進(jìn)行消化，(根據(jù)經(jīng)驗(yàn))，晃動使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘，鏡下見細(xì)胞收縮變圓或少數(shù)脫落后，輕輕振動瓶底使細(xì)胞全部脫落，加入2-3ml*培養(yǎng)基后，輕輕吹打，使細(xì)胞基本成單個懸浮，然后分置其它無菌培養(yǎng)瓶內(nèi)，加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或?qū)嶒?yàn)。
操作流程：
1.1 主要試劑與儀器：倒置相差顯微鏡（日本 olympus imt-413），co2孵箱（日本yamato it-61）。
1.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存：
1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液（37℃預(yù)熱，8～10倍體積）離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi)，在37℃、5％co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek－293細(xì)胞48h換液1次，細(xì)胞長至60%～70%融合時，用0.25%胰酶消化1～2min，將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁、懸浮、分散，為使細(xì)胞進(jìn)一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次，獲得細(xì)胞懸液，然后加入倍量的培養(yǎng)基，溫和混勻，吸管分裝混合液，傳代擴(kuò)增細(xì)胞。
1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細(xì)胞的計(jì)數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞，待細(xì)胞變圓、脫壁并浮起，加入少量培養(yǎng)基離心，再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液。在細(xì)胞計(jì)數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液，用10×物鏡觀察計(jì)數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù)，按公式計(jì)算出細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞數(shù)/ml原液＝(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生長期的細(xì)胞，以0.25％胰酶消化成單細(xì)胞懸液，計(jì)數(shù)后分別接種于12個25cm2培養(yǎng)瓶中，每兩小時隨機(jī)取出3瓶細(xì)胞，吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞，加入胰消化酶消化、計(jì)數(shù)已貼壁細(xì)胞，取其平均值，按照公式：貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ×100％，計(jì)算貼壁率。 
1.6 生長曲線 取指數(shù)生長期的細(xì)胞用胰酶消化制成單細(xì)胞懸液，以1×104/孔接種于24孔板，每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機(jī)取3孔，計(jì)數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計(jì)算平均值。連續(xù)計(jì)數(shù)10d，繪制細(xì)胞生長曲線
Anti-factor VIII/FITC 熒光素標(biāo)記第八因子相關(guān)抗原抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Anti-N-cadherin /FITC 熒光素標(biāo)記N-鈣粘附分子抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh C16orf7/ATP-BL 16號染色體開放閱讀框7抗體 規(guī)格 0.2ml

PPAR-delta (peroxisome proliferator-activated receptor) D型-過氧化酶活化增生受體(多肽) 0.5mg

HDC 英文名稱： L-組酸脫羧酶抗體 0.1ml

Rhesus antibody Rh RNF8 環(huán)指蛋白8抗體 規(guī)格 0.2ml

Anti-N-cadherin /FITC 熒光素標(biāo)記N-鈣粘附分子抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
Insulin Receptor(ISR) 胰島素受體(抗原)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg

Anti-CD23/Fc EpsilonR II CD23抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh PALB2 癌易感基因相關(guān)蛋白2 規(guī)格 0.1ml

CEACAM5 Kit Human 人 CEACAM5 / CD66e ELISA配對抗體 ELISA

TEF3 英文名稱： 轉(zhuǎn)錄增強(qiáng)因子TEF3抗體 0.2ml

CPA6 英文名稱： 胰羧肽酶A6抗體 0.2ml

Anti-CD23/Fc EpsilonR II CD23抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
Rabbit Anti-human sIgA/PE-CY5 PE-CY5標(biāo)記的兔抗人分泌型IgA 0.1ml

FAF1 英文名稱： Fas相關(guān)1因子抗體 0.1ml

表皮生長因子受體抗體 Anti-EGF-R 0.1ml

anti-PDI/FITC 熒光素標(biāo)記蛋白質(zhì)二硫鍵異構(gòu)酶抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh phospho-TCF3/E47/E2A(Thr355) 磷酸化轉(zhuǎn)錄因子3抗體 規(guī)格 0.1ml

Avidin/FITC 熒光素標(biāo)記親合素Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml
IGFBP-2 ELISA Kit 大鼠胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白2Multi-class antibodies規(guī)格： 48T

Anti-Protein C/FITC 熒光素標(biāo)記APC活化蛋白C抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh FAM76B FAM76B蛋白抗體 規(guī)格 0.2ml

EGF(Human Epidermal growth factor) ELISA Kit 人表皮生長因子 96T

Phospho-MEK1 + MEK2 (Ser222) 英文名稱： 磷酸化原活化蛋白激酶激酶1/2抗體 0.1ml

ACSL1 英文名稱： 長鏈脂肪酸輔酶A連接酶1/2抗體 0.2ml

Anti-Protein C/FITC 熒光素標(biāo)記APC活化蛋白C抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
懸浮細(xì)胞: 一般傳代可直接將細(xì)胞原液分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi)，加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)，如要高濃度可先離心1000rpm，5min后加入*培養(yǎng)基，輕輕吹勻后，分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi)加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。需要指出的是，在不同的科研小組中這些術(shù)語的定義會有所不同。許多研究員不用細(xì)胞系這個詞表示細(xì)胞群除非細(xì)胞經(jīng)過了遺傳改造。