細(xì)胞名稱  水牛皮膚成纖維樣細(xì)胞；WB-S1培養(yǎng)
形態(tài)特性 成纖維細(xì)胞樣

品牌 貼壁生長

特征特性 該細(xì)胞系來源于一雌性河川型水牛與沼澤型水牛雜交后代的耳部皮膚組織，2010年由中科院昆明細(xì)胞庫建立。

培養(yǎng)條件 DMEM-H：

Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 10%FBS  

傳代方法 1：

2傳代；3-4天一次  

傳代情況 P2

凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS　

支原體檢測 熒光法（-）　

STR -

同工酶

染色體

使用權(quán)限 A類
水牛皮膚成纖維樣細(xì)胞；WB-S1培養(yǎng)貼壁細(xì)胞: 對于貼壁細(xì)胞應(yīng)先吸(倒)盡培養(yǎng)基，吸的越干凈越好，以免中和后加入的消化液，使強度減弱（或PBS洗1－3次）。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml，按此比例進(jìn)行消化，(根據(jù)經(jīng)驗)，晃動使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘，鏡下見細(xì)胞收縮變圓或少數(shù)脫落后，輕輕振動瓶底使細(xì)胞全部脫落，加入2-3ml*培養(yǎng)基后，輕輕吹打，使細(xì)胞基本成單個懸浮，然后分置其它無菌培養(yǎng)瓶內(nèi)，加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或?qū)嶒灐?/span>
操作流程：
1.1 主要試劑與儀器：倒置相差顯微鏡（日本 olympus imt-413），co2孵箱（日本yamato it-61）。
1.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存：
1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液（37℃預(yù)熱，8～10倍體積）離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi)，在37℃、5％co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek－293細(xì)胞48h換液1次，細(xì)胞長至60%～70%融合時，用0.25%胰酶消化1～2min，將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁、懸浮、分散，為使細(xì)胞進(jìn)一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次，獲得細(xì)胞懸液，然后加入倍量的培養(yǎng)基，溫和混勻，吸管分裝混合液，傳代擴增細(xì)胞。
1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細(xì)胞的計數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞，待細(xì)胞變圓、脫壁并浮起，加入少量培養(yǎng)基離心，再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液。在細(xì)胞計數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液，用10×物鏡觀察計數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù)，按公式計算出細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞數(shù)/ml原液＝(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生長期的細(xì)胞，以0.25％胰酶消化成單細(xì)胞懸液，計數(shù)后分別接種于12個25cm2培養(yǎng)瓶中，每兩小時隨機取出3瓶細(xì)胞，吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞，加入胰消化酶消化、計數(shù)已貼壁細(xì)胞，取其平均值，按照公式：貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ×100％，計算貼壁率。 
1.6 生長曲線 取指數(shù)生長期的細(xì)胞用胰酶消化制成單細(xì)胞懸液，以1×104/孔接種于24孔板，每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機取3孔，計數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計算平均值。連續(xù)計數(shù)10d，繪制細(xì)胞生長曲線
Anti-CTBP1/FITC 熒光素標(biāo)記C端結(jié)合蛋白1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Anti-LAIR-1/CD305/FITC 熒光素標(biāo)記白細(xì)胞相關(guān)免疫球蛋白樣受體1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh CCDC106 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白106抗體 規(guī)格 0.2ml

GATA-4(GATA binding factor 4) GATA結(jié)合蛋白4抗原 0.5mg

HCV-NS4a 英文名稱： 丙型肝炎病毒-NS4a抗體 0.1ml

Rhesus antibody Rh SLC4A4 碳酸氫鈉協(xié)同轉(zhuǎn)運蛋白4-A4抗體 規(guī)格 0.1ml

Anti-LAIR-1/CD305/FITC 熒光素標(biāo)記白細(xì)胞相關(guān)免疫球蛋白樣受體1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
i-PTH(Human intact Parathormone) ELISA Kit 人全段甲狀旁腺素Multi-class antibodies規(guī)格： 48T

Anti-LRP1/CD91 低密度脂蛋白相關(guān)受體1抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh KLF2 肺Kruppel樣因子抗體 規(guī)格 0.2ml

INS ELISA Kit 大鼠胰島素 96T

prox1 英文名稱： prox-1抗體 0.1ml

c-Myb 英文名稱： 轉(zhuǎn)錄激活因子MYB抗體 0.2ml

Anti-LRP1/CD91 低密度脂蛋白相關(guān)受體1抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
Rabbit anti-MG IgG/Cy7 Cy7標(biāo)記的兔抗長爪沙鼠IgG 0.1ml

GLI1 英文名稱： 腦膠質(zhì)瘤相關(guān)蛋白抗體(鋅指蛋白5) 0.1ml

Rhesus antibody Rh APPL1 銜接因子蛋白含pH域磷酸酪氨酸結(jié)合域和亮氨酸拉鏈蛋白1抗體 規(guī)格 0.1ml

Anti-phospho-IKK gamma (Ser31) /FITC 熒光素標(biāo)記磷酸化核因子κB激酶gamma抑制劑抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh Rabbit anti-MG IgG/PE-Cy7 PE-Cy7標(biāo)記的兔抗長爪沙鼠IgG 規(guī)格 0.1ml

Anti-Phospho-Rb (Ser807/Ser811)/FITC 熒光素標(biāo)記磷酸化視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤相關(guān)蛋白1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
Anti-Bcl-6/Bcl-5/FITC 熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠原癌基因Bcl-6抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Anti-Glasses Snake poison Protein/FITC 熒光素標(biāo)記抗眼鏡蛇蛇毒蛋白抗體(眼鏡蛇)IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh CKIP-1 酪蛋白激酶2相互作用蛋白1抗體 規(guī)格 0.2ml

ECG2 (sophagus cancer-related gene-2) 食道癌相關(guān)基因(抗原) 0.5mg

IRE1a 英文名稱： 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)核信號轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白a1抗體 0.2ml

Rhesus antibody Rh Transferrin receptor 轉(zhuǎn)鐵蛋白受體抗體 規(guī)格 0.1ml

Anti-Glasses Snake poison Protein/FITC 熒光素標(biāo)記抗眼鏡蛇蛇毒蛋白抗體(眼鏡蛇)IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
懸浮細(xì)胞: 一般傳代可直接將細(xì)胞原液分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi)，加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)，如要高濃度可先離心1000rpm，5min后加入*培養(yǎng)基，輕輕吹勻后，分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi)加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。需要指出的是，在不同的科研小組中這些術(shù)語的定義會有所不同。許多研究員不用細(xì)胞系這個詞表示細(xì)胞群除非細(xì)胞經(jīng)過了遺傳改造。