細(xì)胞名稱  水牛皮膚成纖維樣細(xì)胞；WB-S5培養(yǎng)
形態(tài)特性 成纖維細(xì)胞樣

品牌 貼壁生長(zhǎng)

特征特性 該細(xì)胞系來源于一雌性河川型水牛與沼澤型水牛雜交后代的耳部皮膚組織，2010年由中科院昆明細(xì)胞庫建立。

培養(yǎng)條件 DMEM-H：

Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 10%FBS  

傳代方法 1：

2傳代；3-4天一次  

傳代情況 P2

凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS　

支原體檢測(cè) 熒光法（-）　

STR -

同工酶

染色體

使用權(quán)限 A類
水牛皮膚成纖維樣細(xì)胞；WB-S5培養(yǎng)貼壁細(xì)胞: 對(duì)于貼壁細(xì)胞應(yīng)先吸(倒)盡培養(yǎng)基，吸的越干凈越好，以免中和后加入的消化液，使強(qiáng)度減弱（或PBS洗1－3次）。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml，按此比例進(jìn)行消化，(根據(jù)經(jīng)驗(yàn))，晃動(dòng)使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘，鏡下見細(xì)胞收縮變圓或少數(shù)脫落后，輕輕振動(dòng)瓶底使細(xì)胞全部脫落，加入2-3ml*培養(yǎng)基后，輕輕吹打，使細(xì)胞基本成單個(gè)懸浮，然后分置其它無菌培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或?qū)嶒?yàn)。
操作流程：
1.1 主要試劑與儀器：倒置相差顯微鏡（日本 olympus imt-413），co2孵箱（日本yamato it-61）。
1.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存：
1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動(dòng),使之迅速融化。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液（37℃預(yù)熱，8～10倍體積）離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，在37℃、5％co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek－293細(xì)胞48h換液1次，細(xì)胞長(zhǎng)至60%～70%融合時(shí)，用0.25%胰酶消化1～2min，將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁、懸浮、分散，為使細(xì)胞進(jìn)一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次，獲得細(xì)胞懸液，然后加入倍量的培養(yǎng)基，溫和混勻，吸管分裝混合液，傳代擴(kuò)增細(xì)胞。
1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長(zhǎng)情況及形態(tài)特征。
1.4 細(xì)胞的計(jì)數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞，待細(xì)胞變圓、脫壁并浮起，加入少量培養(yǎng)基離心，再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液。在細(xì)胞計(jì)數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液，用10×物鏡觀察計(jì)數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù)，按公式計(jì)算出細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞數(shù)/ml原液＝(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞，以0.25％胰酶消化成單細(xì)胞懸液，計(jì)數(shù)后分別接種于12個(gè)25cm2培養(yǎng)瓶中，每?jī)尚r(shí)隨機(jī)取出3瓶細(xì)胞，吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞，加入胰消化酶消化、計(jì)數(shù)已貼壁細(xì)胞，取其平均值，按照公式：貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ×100％，計(jì)算貼壁率。 
1.6 生長(zhǎng)曲線 取指數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞用胰酶消化制成單細(xì)胞懸液，以1×104/孔接種于24孔板，每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機(jī)取3孔，計(jì)數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計(jì)算平均值。連續(xù)計(jì)數(shù)10d，繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線
Anti-phospho-Cyclin E(Thr62) /FITC 熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠磷酸化周期素E抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Anti-Phospho-LIMK1 (Thr508)/LIMK2 (Thr505) /FITC 熒光素標(biāo)記磷酸化單絲氨酸蛋白激酶1/2抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh Caspase-1(actived P10) 天冬氨酸-胱氨酸特異性蛋白酶家族抗體 規(guī)格 0.1ml

Emp1 (epithelial membrane protein 1) 表皮膜蛋白1抗原 0.5ml

HCST 英文名稱： 造血細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白抗體 0.2ml

Rhesus antibody Rh SIPA1 信號(hào)誘導(dǎo)增殖相關(guān)蛋白1抗體 規(guī)格 0.2ml

Anti-Phospho-LIMK1 (Thr508)/LIMK2 (Thr505) /FITC 熒光素標(biāo)記磷酸化單絲氨酸蛋白激酶1/2抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
IRAK(Human interleukin receptor associated kinase) ELISA Kit 人白介素受體相關(guān)激酶Multi-class antibodies規(guī)格： 48T

Anti-NCX2/SLC8A2 鈉鈣交換蛋白2抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh IL-31 白細(xì)胞介素31抗體 規(guī)格 0.2ml

MIP-3 Beta/ELC/CCL19 ELISA Kit 大鼠巨噬細(xì)胞炎性蛋白3β 96T

PIG3 英文名稱： p53誘導(dǎo)蛋白3抗體 0.2ml

CD66c 英文名稱： 癌胚抗原相關(guān)細(xì)胞粘附分子抗體 0.1ml

Anti-NCX2/SLC8A2 鈉鈣交換蛋白2抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
Rabbit anti-MG IgG/PE PE標(biāo)記的兔抗長(zhǎng)爪沙鼠IgG 0.1ml

Guanylyl Cyclase alpha 2 英文名稱： 鳥苷酸環(huán)化酶α2/GCS-α-2抗體 0.2ml

Rhesus antibody Rh AQP2 水通道蛋白-2抗體 規(guī)格 0.1ml

Anti-IL-3/FITC (mouse, rat) 熒光素標(biāo)記白介素3抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh Rabbit Anti-Mink IgG/AP 堿性磷酸酶(AP)標(biāo)記的兔抗水貂IgG 規(guī)格 0.1ml

Anti-PPIG/FITC 熒光素標(biāo)記親環(huán)蛋白(親環(huán)素)PPIG抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
Anti-Phospho-Ret (Tyr905) /FITC 熒光素標(biāo)記磷酸化指狀蛋白R(shí)ET抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Anti-phosphor-LKB1(Ser428) /FITC 熒光素標(biāo)記磷酸化絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh CASD1/C7orf12 第七號(hào)染色體開放閱讀框12抗體 規(guī)格 0.2ml

ECE1(Endothelin Converting Enzyme 1) 內(nèi)皮素轉(zhuǎn)化酶1抗原 0.5mg

Hepatitis C Virus genotype 1a NS5 英文名稱： 丙型肝炎病毒1a基因型NS5蛋白抗體 0.2ml

Rhesus antibody Rh Sidekick 2 細(xì)胞粘附分子伴侶蛋白2抗體 規(guī)格 0.2ml

Anti-phosphor-LKB1(Ser428) /FITC 熒光素標(biāo)記磷酸化絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
懸浮細(xì)胞: 一般傳代可直接將細(xì)胞原液分置其它培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)，如要高濃度可先離心1000rpm，5min后加入*培養(yǎng)基，輕輕吹勻后，分置其它培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。需要指出的是，在不同的科研小組中這些術(shù)語的定義會(huì)有所不同。許多研究員不用細(xì)胞系這個(gè)詞表示細(xì)胞群除非細(xì)胞經(jīng)過了遺傳改造。