大額牛肺細(xì)胞；BFR-L1價(jià)格懸浮細(xì)胞: 一般傳代可直接將細(xì)胞原液分置其它培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)，如要高濃度可先離心1000rpm，5min后加入*培養(yǎng)基，輕輕吹勻后，分置其它培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。需要指出的是，在不同的科研小組中這些術(shù)語(yǔ)的定義會(huì)有所不同。許多研究員不用細(xì)胞系這個(gè)詞表示細(xì)胞群除非細(xì)胞經(jīng)過(guò)了遺傳改造。
細(xì)胞名稱  大額牛肺細(xì)胞；BFR-L1價(jià)格
形態(tài)特性 成纖維細(xì)胞樣

品牌 貼壁生長(zhǎng)

特征特性 該細(xì)胞系來(lái)源于一雄性新生大額牛的肺組織。2000年由中國(guó)科學(xué)院昆明細(xì)胞庫(kù)建立。

培養(yǎng)條件 M-199：

with Earle's Balanced Salts Solution (EBSS) 胎牛血清 15%  

傳代方法 1：

2傳代；3-4天一次  

傳代情況 P3

凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS　

支原體檢測(cè) 熒光法（-）　

STR -

同工酶

染色體

使用權(quán)限 B類(lèi)
貼壁細(xì)胞: 對(duì)于貼壁細(xì)胞應(yīng)先吸(倒)盡培養(yǎng)基，吸的越干凈越好，以免中和后加入的消化液，使強(qiáng)度減弱（或PBS洗1－3次）。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml，按此比例進(jìn)行消化，(根據(jù)經(jīng)驗(yàn))，晃動(dòng)使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘，鏡下見(jiàn)細(xì)胞收縮變圓或少數(shù)脫落后，輕輕振動(dòng)瓶底使細(xì)胞全部脫落，加入2-3ml*培養(yǎng)基后，輕輕吹打，使細(xì)胞基本成單個(gè)懸浮，然后分置其它無(wú)菌培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或?qū)嶒?yàn)。
操作流程：
1.1 主要試劑與儀器：倒置相差顯微鏡（日本 olympus imt-413），co2孵箱（日本yamato it-61）。
1.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存：
1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動(dòng),使之迅速融化。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開(kāi),吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液（37℃預(yù)熱，8～10倍體積）離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，在37℃、5％co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek－293細(xì)胞48h換液1次，細(xì)胞長(zhǎng)至60%～70%融合時(shí)，用0.25%胰酶消化1～2min，將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁、懸浮、分散，為使細(xì)胞進(jìn)一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次，獲得細(xì)胞懸液，然后加入倍量的培養(yǎng)基，溫和混勻，吸管分裝混合液，傳代擴(kuò)增細(xì)胞。
1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長(zhǎng)情況及形態(tài)特征。
1.4 細(xì)胞的計(jì)數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞，待細(xì)胞變圓、脫壁并浮起，加入少量培養(yǎng)基離心，再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液。在細(xì)胞計(jì)數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液，用10×物鏡觀察計(jì)數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù)，按公式計(jì)算出細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞數(shù)/ml原液＝(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞，以0.25％胰酶消化成單細(xì)胞懸液，計(jì)數(shù)后分別接種于12個(gè)25cm2培養(yǎng)瓶中，每?jī)尚r(shí)隨機(jī)取出3瓶細(xì)胞，吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞，加入胰消化酶消化、計(jì)數(shù)已貼壁細(xì)胞，取其平均值，按照公式：貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ×100％，計(jì)算貼壁率。 
1.6 生長(zhǎng)曲線 取指數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞用胰酶消化制成單細(xì)胞懸液，以1×104/孔接種于24孔板，每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機(jī)取3孔，計(jì)數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計(jì)算平均值。連續(xù)計(jì)數(shù)10d，繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線
Anti-DRADA/ADAR1/FITC 熒光素標(biāo)記雙鏈RNA腺苷酸脫氨基酶抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Anti-Phospho-MDM2 (Ser166) /FITC 熒光素標(biāo)記磷酸化雙微體2癌基因抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh CA III/Carbonic anhydrase 3 碳酸酐酶3抗體 規(guī)格 0.2ml

CG6856-PA peptide CG6856-PA抗原 0.5mg

HCN2 + HCN4 英文名稱： 環(huán)化核苷酸調(diào)控陽(yáng)離子通道蛋白亞型2/4抗體 0.2ml

Rhesus antibody Rh SDHD 線粒體琥珀酸脫氫酶D抗體 規(guī)格 0.2ml

Anti-Phospho-MDM2 (Ser166) /FITC 熒光素標(biāo)記磷酸化雙微體2癌基因抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
Irna(Human Immune RNA) ELISA Kit 人免疫核糖核酸Multi-class antibodies規(guī)格： 48T

Anti-phospho-FSCN1(Ser39) 磷酸化纖維束蛋白同源物1抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh Histone H3 (Di Methyl K4) 二甲基化組蛋白H3K4抗體 規(guī)格 0.1ml

SRP(Human signal recognization particle antibody) ELISA Kit 人抗信號(hào)識(shí)別顆粒抗體 96T

recPEP 英文名稱： 重組豬乙腦病毒結(jié)構(gòu)蛋白抗體 0.1ml

COMMD3 英文名稱： 銅代謝結(jié)構(gòu)域蛋白3抗體 0.2ml

Anti-phospho-FSCN1(Ser39) 磷酸化纖維束蛋白同源物1抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml
Rabbit Anti-Mink IgG 兔抗水貂IgG 1mg

FRMD5 英文名稱： FRMD5蛋白抗體 0.2ml

戊型肝炎病毒抗體 Anti-HEV 0.1ml

Anti-Phospho-PKC alpha/beta II (Thr638/641)/FITC 熒光素標(biāo)記磷酸化蛋白激酶C α/β2抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh phospho-RPH3AL(Ser234) 磷酸化Ras相關(guān)GTP結(jié)合蛋白抗體 規(guī)格 0.1ml

Guinea IgG (親和純化) 豚鼠IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 10mg
Col IV (Mouse Collagen Type IV ) ELISA KIT 小鼠Ⅳ型膠原Multi-class antibodies規(guī)格： 48T

Anti-CD19/PE 熒光素PE標(biāo)記CD19抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh E1 glycoprotein 風(fēng)疹病毒糖蛋白抗體 規(guī)格 0.2ml

EB-VCA IgG EB 病毒 IgG(間接法二步法)

MTCP1 英文名稱： 成熟T淋巴細(xì)胞增殖蛋白1抗體 0.2ml

ALAS-E 英文名稱： 5-基乙酰丙酸合酶1抗體 0.2ml

Anti-CD19/PE 熒光素PE標(biāo)記CD19抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml