人APP基因轉(zhuǎn)染CHO細胞株;7WD10培養(yǎng)
- 公司名稱 上海研生實業(yè)有限公司
- 品牌 ATCC
- 型號
- 產(chǎn)地 進口/國產(chǎn)
- 廠商性質(zhì) 經(jīng)銷商
- 更新時間 2018/5/7 15:47:40
- 訪問次數(shù) 475
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細胞名稱 人APP基因轉(zhuǎn)染CHO細胞株;7WD10培養(yǎng)
形態(tài)特性 梭形
品牌 貼壁生長
特征特性 采用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染的方法,穩(wěn)定轉(zhuǎn)染CHO細胞野生型AβPPTS1 基因,所得細胞表達野生型AβPPTS1蛋白。
培養(yǎng)條件 DMEM-H:
Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 10%FBS;250ug/ml G418
傳代方法 1:
3傳代;2~3天一次。
傳代情況 不詳
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 培養(yǎng)法(-)
STR -
同工?
人APP基因轉(zhuǎn)染CHO細胞株;7WD10培養(yǎng)貼壁細胞: 對于貼壁細胞應(yīng)先吸(倒)盡培養(yǎng)基,吸的越干凈越好,以免中和后加入的消化液,使強度減弱(或PBS洗1-3次)。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml,按此比例進行消化,(根據(jù)經(jīng)驗),晃動使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘,鏡下見細胞收縮變圓或少數(shù)脫落后,輕輕振動瓶底使細胞全部脫落,加入2-3ml*培養(yǎng)基后,輕輕吹打,使細胞基本成單個懸浮,然后分置其它無菌培養(yǎng)瓶內(nèi),加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或?qū)嶒灐?/span>
操作流程:
1.1 主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293細胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存:
1.2.1 細胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液(37℃預(yù)熱,8~10倍體積)離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi),在37℃、5%co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細胞傳代 原代培養(yǎng)的hek-293細胞48h換液1次,細胞長至60%~70%融合時,用0.25%胰酶消化1~2min,將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細胞脫壁、懸浮、分散,為使細胞進一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,獲得細胞懸液,然后加入倍量的培養(yǎng)基,溫和混勻,吸管分裝混合液,傳代擴增細胞。
1.3 細胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細胞的計數(shù) 常規(guī)消化細胞,待細胞變圓、脫壁并浮起,加入少量培養(yǎng)基離心,再用pbs重懸并吹打制成細胞懸液。在細胞計數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細胞懸液,用10×物鏡觀察計數(shù)板四角大方格細胞數(shù),按公式計算出細胞數(shù)。細胞數(shù)/ml原液=(四方格細胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細胞的貼壁率 指數(shù)生長期的細胞,以0.25%胰酶消化成單細胞懸液,計數(shù)后分別接種于12個25cm2培養(yǎng)瓶中,每兩小時隨機取出3瓶細胞,吸除培養(yǎng)基及未貼壁細胞,加入胰消化酶消化、計數(shù)已貼壁細胞,取其平均值,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細胞數(shù)/接種細胞數(shù)) ×100%,計算貼壁率。
1.6 生長曲線 取指數(shù)生長期的細胞用胰酶消化制成單細胞懸液,以1×104/孔接種于24孔板,每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機取3孔,計數(shù)每孔細胞的數(shù)目并計算平均值。連續(xù)計數(shù)10d,繪制細胞生長曲線
Anti-HPV/FITC 熒光素標記人類狀瘤病毒抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Anti-phospho-c-Jun (Ser63) /FITC 熒光素標記磷酸化原癌基因c-Jun抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh AT2R/AT1 血管緊張素Ⅱ受體1抗體 規(guī)格 0.2ml
Mouse Anti-human IgG(3D3)/PE-CY5 PE-CY5標記的鼠抗人IgG單克隆抗體 0.1ml
GSTA1 英文名稱: 谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶α1抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh Rabbit Anti-mouse IgG-Fc/Alexa Fluor 647 Alexa Fluor 647標記的兔抗小鼠IgG-Fc 規(guī)格 0.1ml
Anti-phospho-c-Jun (Ser63) /FITC 熒光素標記磷酸化原癌基因c-Jun抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
LPO(Human lipid peroxlde) ELISA Kit 人過氧化脂質(zhì)/乳過氧化物酶Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-NGX6 鼻咽癌細胞相關(guān)基因6抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
Rhesus antibody Rh IL-17 白介素-17抗體 規(guī)格 0.1ml
Human anti-IVIgG antibody ELISA Kit 人抗IVIgG抗體 96T
PTPN7 英文名稱: 非受體型蛋白酪酸磷酸酶7抗體 0.2ml
Phospho-CDC42 (Ser71) 英文名稱: 磷酸化細胞分化周期CDC42蛋白抗體 0.1ml
Anti-NGX6 鼻咽癌細胞相關(guān)基因6抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
Rabbit anti-mouse Kappa light chain/Alexa Fluor 555 Alexa Fluor 555標記的兔抗小鼠k鏈 0.1ml
Grpa 英文名稱: 半乳糖凝集素相關(guān)蛋白A抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh AP2M1/AP-2 接頭相關(guān)蛋白復(fù)合體AP-2μ鏈1抗體 規(guī)格 0.2ml
Anti-IL-18R Alpha/FITC 熒光素標記白細胞介素-18受體α鏈抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Rabbit Anti-human IgM/Bio 生物素標記的兔抗人IgM 規(guī)格 0.3ml
Anti-Phospho-Raptor (Ser792) /FITC 熒光素標記磷酸化mTOR相關(guān)調(diào)控蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Anti-PRDX3/FITC 熒光素標記過氧化還原酶3抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rabbit Anti-horse IgG Whole serum 兔抗馬IgG抗血清Multi-class antibodies規(guī)格: 1ml
擬南芥IKI3抗體 Anti-IKI3 family protein 0.2ml
Donkey anti-Gpig IgG whole serum 驢抗豚鼠IgG抗血清 1ml
FAKD3 英文名稱: 下頜發(fā)育不良綜合征相關(guān)蛋白FAKD3抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh phospho-PTPN7(Ser93) 磷酸化非受體型蛋白酪氨酸磷酸酶7抗體 規(guī)格 0.1ml
Rabbit Anti-horse IgG Whole serum 兔抗馬IgG抗血清Multi-class antibodies規(guī)格: 1ml
懸浮細胞: 一般傳代可直接將細胞原液分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi),加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),如要高濃度可先離心1000rpm,5min后加入*培養(yǎng)基,輕輕吹勻后,分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi)加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。需要指出的是,在不同的科研小組中這些術(shù)語的定義會有所不同。許多研究員不用細胞系這個詞表示細胞群除非細胞經(jīng)過了遺傳改造。