總體RNA甲基化極易定量檢測試劑盒（熒光法）

此品非常適合從各種細(xì)胞、組織、哺乳動物、真菌、細(xì)菌、植物、血漿和血清等樣本中提取的總RNA，進(jìn) 行總體水平的RNA甲基化定量分析，整個實(shí)驗(yàn)時間僅需2.4小時。主要檢測儀器：熒光分光光度計。

 重點(diǎn)提示

使用必讀：

使用：總體RNA甲基化極易定量檢測試劑盒（熒光法）） 專門為定量檢測總RNA中 RNA 甲基化水平而設(shè)計的。其中總RNA可以是來自哺乳動物，植物，真菌，細(xì)菌和病毒等樣本 中得到的，但不*于此，培養(yǎng)細(xì)胞、新鮮和冷凍的組織、血漿/血清樣本和體液等樣本。  

RNA輸入量：對于每次實(shí)驗(yàn)RNA的輸入量是50-300 ng.zui為理想的RNA的輸入量應(yīng)該 是200 ng，正如我們所知，在某些種屬中RNA中的5-mC通常不到總RNA的0.1%。

起始材料：非常適合使用各種細(xì)胞和組織樣本，比如：來自培養(yǎng)瓶和微孔板培養(yǎng)的細(xì)胞， 新鮮和冷凍的組織，石蠟包埋組織，血漿/血清樣本，體液樣本等等。

內(nèi)控：這個試劑盒中包括了陽性RNA對照和陰性RNA對照。使用0.05%到2% 的RNA 對照繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。因?yàn)椴煌慕M織之間RNA中5-mC的含量不一樣；正常的和病變的部分 也不一樣；或處理和不處理的條件。因此，我們建議使用二份樣本來做，這樣可以保證生成 信號的可信性。這個試劑盒容許實(shí)驗(yàn)人員對于RNA進(jìn)行定量并且是取二份不同提取的 RNA樣本對于RNA進(jìn)行相對定量分析。

預(yù)防措施:       為了避免交叉污染，小心的吸取樣本或?qū)⑷芤禾砑拥轿⒖装逯?。使用帶濾芯的吸頭， 并且在不同溶液的轉(zhuǎn)移中，要及時的更換槍頭。在整個實(shí)驗(yàn)操作過程中，建議帶上手套。如 果手套與樣本有接觸，應(yīng)該立即更換新的手套。

產(chǎn)品簡介

在 DNA 中 5-甲基胞嘧啶通過 DNA 甲基轉(zhuǎn)移酶甲基組的同價原理發(fā)生在胞嘧啶環(huán)的第五位碳原子上。這個過 程很好地被研究并且通常伴隨有基因的表達(dá)和抑制。尤其是在人類中觀測到，5-甲基胞嘧啶發(fā)生在各種形

式的 RNA 分子中，包括 tRNAs,rRNAs,mRNAs 和非編碼 RNAs(ncRNAs)。5-甲基胞嘧啶看起來都富集于 ncRNA

這類中，但是相對的在 mRNAs 中是在減少。 5-甲基胞嘧啶的水平在動物基因組中是不一樣的，水平量在一

些昆蟲中不被發(fā)覺的到在人類細(xì)胞中大概有 0.1-0.45%的總 RNA 量。大多數(shù)（83%）的 5-甲基胞嘧啶是在

mRNAs 中發(fā)現(xiàn)的。在這些轉(zhuǎn)錄中，5-甲基胞嘧啶在蛋白編碼測序中出現(xiàn)減少；而在 5’和 3’UTRs 中出現(xiàn)富

集。*，2 種不同的甲基轉(zhuǎn)移酶，NSUN2 和 DNMT2 在真核生物 RNA 中通過催化 5-甲基胞嘧啶的修飾

形式，會減少 5-mC?，F(xiàn)在已經(jīng)有很有力的證據(jù)表明：RNA 胞嘧啶的甲基化影響著各種生物進(jìn)化的規(guī)則例如：

RNA 穩(wěn)定性和 mRNA 翻譯。此外，在拱形 RNAs 中 5-mC 的缺失會異常的引起相關(guān)的小 RNA 片段化且這些小 RNA

發(fā)揮著正常的功能。因此，拱形 ncRNA 的損失可能有助于發(fā)現(xiàn)人類因缺失 NSUN2 而引起的發(fā)揮失調(diào)。

*您擴(kuò)展閱讀如下內(nèi)容：*，在真核生物中，m6A (N6-methyladenosine)是在 RNA 分子中zui常見

的和豐富存在的。這種修飾是由 m6A 催化甲基轉(zhuǎn)移酶復(fù)雜 METTL3 和zui近發(fā)的 m6A RNA 去甲基轉(zhuǎn)移酶如 FTO 和 ALKBH5，這種 m6A RNA 去甲基是以 α-ketoglutarate m6A(α-KG)-和 Fe2+-方式進(jìn)行的。 結(jié)果表明, 在 許多生物過程中，如從生命發(fā)展和代謝生育，METTL3,FTO 和 ALKBH5 扮演著重要角色。超過 80%的 m6A 是以

RNA 甲基化的形式存在于不同的物種。 m6A 主要分布在 mRNA 和也發(fā)生在非編碼 RNA(ncRNA)如 tRNA,rRNA

和 snRNA。相對豐富的 m6A 在 mRNA 轉(zhuǎn)錄時已經(jīng)表明影響核糖核酸代謝過程,如拼接,核出口,翻譯能力和穩(wěn)

定性,RNA 轉(zhuǎn)錄。異常甲基化水平的 m6A 誘導(dǎo)缺陷甲基化酶和 m6A RNA 去甲基酶可能導(dǎo)致 RNA 功能障礙的和

疾病發(fā)生。例如,異常低水平在正常 m6A 目標(biāo)由于增加患者 FTO 活動、FTO 基因突變,通過迄今還未通路,導(dǎo)

致了肥胖和相關(guān)疾病的發(fā)作。動態(tài)和可逆化學(xué) m6A 修飾，在 RNA 中也可以作為一種新穎的表觀遺傳標(biāo)記的

生物學(xué)，意義深遠(yuǎn)可以預(yù)見。因此，更多的有用的信息，更好理解 m6A RNA 甲基化水平和分布對 RNA 轉(zhuǎn)錄、

診斷和治療疾病非常有益。

該產(chǎn)品中,總RNA必將結(jié)合在微孔板上，使用一種高特異性的RNA溶液方案。使用特異性較強(qiáng)的捕獲抗體和檢

測抗體來分析m6A。檢測產(chǎn)生的增強(qiáng)信號,然后通過讀取在微型板分光光度計波長為450 nm處吸光度進(jìn)行比

色定量。m6A的數(shù)量與測量的OD值強(qiáng)度是成正比的。在這個試劑盒中包括陽性和陰性對照。繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線 (范

圍:0.02到1 ng的m6A)或單點(diǎn)對照的m6A可以用作陽性對照。因?yàn)閙6A的含量，在不同的組織,正常和病變的

部位,或在處理過以及未處理的條件下,我們建議運(yùn)行2份樣品,以確保信號生成的可信心性。這套解決方案

將允許研究人員選擇定量一個數(shù)量的m6A或確定相對m6A RNA甲基化狀態(tài)的兩個不同的RNA樣品。

該款產(chǎn)品擁有一套完整的優(yōu)化緩沖液和試劑體系，可以采用比色或熒光法來定量總RNA中的 m6A

(N6-methyladenosine)。對于總RNA(從哺乳動物，各種組織或細(xì)胞樣本如像培養(yǎng)瓶和培養(yǎng)皿培養(yǎng)的細(xì)胞，

新鮮和冷凍的組織，石蠟包埋組織，血液，體液，植物，真菌，細(xì)菌和病毒等任何樣本中提取的) 中m6A

直接定量檢測甲基化狀態(tài)是非常理想的。更多信息猛戳產(chǎn)品名稱：m6A RNA甲基化定量檢測試劑盒（比色法）

zui近，一些新穎的核苷酸修飾形式，首先在DNA中發(fā)現(xiàn)。比如：5-hmC，5-fC，5-caC。同時這些形式在

人類和小鼠的組織中也被檢測到。這些修飾的核苷酸一般是由5-mC氧化后得到的；通過TET家族酶反應(yīng)得到。

在mRNA中m6A甲基化是可逆的（文獻(xiàn)1）

對于細(xì)胞與組織等樣本，（熒光法） 具有以下

精確和方便的定量檢測5-甲基胞嘧啶是極其的有用。在各種生理學(xué)上和病變中，識別和理解

發(fā)生在RNA上的5-mC甲基化水平的變化是非常有意義的。目前僅有的基于色譜的技術(shù)比

如：MS-LC對于檢測RNA中總體的5-mC水平。然而，這種方法費(fèi)時，通量低，需要的RNA

量多和高成本。為了解決這些問題，我們lian合國外的表觀遺傳學(xué)公司特別的開發(fā)了：總

體RNA甲基化極易定量檢測試劑盒（熒光法）。這款試劑盒有如下的優(yōu)勢和特點(diǎn)：

l 極速：整個操作步驟僅需 2 小時 40 分鐘完成?；谝粋€樣本 2 份分析測定。  l 穩(wěn)定：這款試劑盒容許分析過程有更大的信號窗口，且復(fù)孔只有微小的變化。 l 方便：內(nèi)在低背景噪音，可以消除孔板阻斷的步驟。 l 高敏，檢測的zui低下限為 0.02%的 5-mC RNA，RNA 輸入量是：200ng 。 l 特異性：高特異性地結(jié)合 5-mC，在未甲基化的胞嘧啶或羥甲基化胞嘧啶不會產(chǎn)生交叉反應(yīng)；針對不 同的濃度范圍的樣本 RNA。  l 普遍性：陽性對照和陰性對照容許對任何物種的 RNA，檢測 5-mC RNA。 l 精確性：*的陽性對照是可以按照一定的百分比，分成幾部分，然后繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，精確性更高。 結(jié)果堪比 HPLC-MS 色譜分析。甚至更優(yōu)。  l 靈活性：96 孔可拆卸板模式使研究人員能根據(jù)自己需要選擇手工或是高通量模式分析。 l 操作簡便、可信、分析條件始終如一。