制備色譜

蘭博工業(yè)制備色譜主要特點(diǎn)：
1.雙泵可作梯度洗脫
2.可兼作梯度分析 
3.操作簡(jiǎn)單，檢測(cè)靈敏度高，穩(wěn)定性好 
4.長(zhǎng)期免維護(hù)運(yùn)行 
5.兼容性好 


    制備色譜是一種非常實(shí)用的用于少量樣品純化的技術(shù)。制備色譜可以快速分離反應(yīng)體系混合物中的多種組分，因此對(duì)于獲得試驗(yàn)反應(yīng)產(chǎn)物或天然提取物組分的分離尤其有用。

    制備色譜操作流程：上樣--展開(kāi)--檢測(cè)--刮板--洗脫

    樣品要求：因?yàn)楣枘z板是弱酸性的，對(duì)酸不穩(wěn)定的化合物盡量避免爬大板；對(duì)空氣，水，有機(jī)溶劑穩(wěn)定； 低沸點(diǎn)的溶劑里要好溶；最好有紫外吸收；極性不能太大（至少展開(kāi)劑能爬起來(lái)）。

    上樣：盡量少的溶劑溶解樣品，最好是易揮發(fā)的，二氯甲烷常用，如果不溶可以加幾滴甲醇促溶?？梢杂靡淮涡缘喂苋藁ê蠹舫擅P狀上樣，每個(gè)人的辦法都不同，小編就是這么弄的，順便練練毛筆字。上樣時(shí)也最好像寫毛筆字一樣一氣呵成，這樣跑出來(lái)的帶比較均勻。如樣品溶液太多需要上兩遍樣，先用吹風(fēng)機(jī)吹干溶劑后再上樣。通常情況下， 每塊20X20的大板上樣量：40-60mg; 如果反應(yīng)比較雜的話，可適當(dāng)減少上樣量；上樣的樣品帶距離兩端大約1cm, 距離底邊大約2-3cm，總之控制樣品帶的高度一定要高于展開(kāi)缸中展開(kāi)劑的高度。

    展開(kāi)：展開(kāi)之前，一定將溶劑吹干或晾干，否則會(huì)導(dǎo)致色帶的形狀不規(guī)則。展開(kāi)劑的選擇，先用小板爬樣，具體怎么爬小板，請(qǐng)回看往期文章（ TLC薄層層析技術(shù) ），選到合適的展開(kāi)劑后，配好溶劑爬大板，由于大板和小板由細(xì)微的差別，大板展開(kāi)劑的極性可以稍微比小板展開(kāi)劑的極性大一點(diǎn)，一樣的話也問(wèn)題不大。跑板最好要跑到快頂端1cm左右，充分展開(kāi)樣品，切記不要跑過(guò)，跑過(guò)的話，極性小的點(diǎn)可能會(huì)被展開(kāi)劑沖都一起，而極性大的點(diǎn)雖然不會(huì)沖到上面，但會(huì)變散，不容易判斷色帶的邊緣。

    另外，如果上樣的色帶較寬或者不規(guī)則，可以在展開(kāi)之前提前利用大極性溶劑預(yù)展開(kāi)2-3cm，將寬色帶壓縮成窄帶，然后拿出來(lái)重新吹干，然后再正常展開(kāi)。

    展開(kāi)時(shí)，和爬小板類似，要保持展缸內(nèi)較高的蒸汽壓，最好用重物壓緊展缸蓋。如果展缸有裂紋的話，二氯甲烷甲醇體系千萬(wàn)不要用，石油醚乙酸乙酯體系可以考慮，總之效果都不好。

    如果一次展開(kāi)后，發(fā)現(xiàn)分離效果不佳，可以考慮吹干后重復(fù)展開(kāi)。

    檢測(cè)：產(chǎn)品的判斷，通過(guò)極性大致判斷哪幾個(gè)色帶可能是產(chǎn)品，然后每個(gè)色帶可以先刮一點(diǎn)，碾碎，加甲醇溶解，過(guò)濾送LCMS檢測(cè)判斷。

    能爬大板的樣品一般是有紫外吸收的化合物，這樣可以準(zhǔn)確判斷產(chǎn)物的準(zhǔn)確位置并取得較好的純化效果。沒(méi)有紫外吸收的化合物也可以爬大板，但是得到產(chǎn)物的純度全靠運(yùn)氣了！建議使用微量柱層析純化【 25mg的樣品如何柱層析？ 】。無(wú)紫外吸收的樣品可以參照以下方法盲刮，我們將制備板的一側(cè)進(jìn)行部分顯色，活用玻璃刀將TLC板分割下小部分，通過(guò)部分的顯色情況，來(lái)反推整塊板的顯色情況，所以相對(duì)的對(duì)板的展開(kāi)效果的要求比較高，如果爬的色帶不規(guī)則，那很難得到純的產(chǎn)物。

    其實(shí)不用切割下來(lái)，也可以顯色，利用滴管在板邊緣涂顯色劑，然后顯色，效果也可以。

    產(chǎn)物色帶的判斷： 如果有標(biāo)樣點(diǎn)的話，可以跟標(biāo)樣點(diǎn)TLC檢測(cè)對(duì)照；如果沒(méi)有標(biāo)樣點(diǎn)的話可以將TLC—LCMS或NMR組合判斷；有時(shí)在大板展開(kāi)后，可能會(huì)出現(xiàn)像下方第3塊板的情況，兩條色帶距離特別近，不好判別是不是一個(gè)東西，造成這種狀況的原因可能是過(guò)載或受潮，建議大家將兩條色帶分別刮取后與標(biāo)點(diǎn)對(duì)照來(lái)展開(kāi)判斷是不是一個(gè)東西，再確定能不能合并。
    刮板：判斷好色帶后，在紫外燈下，用鉛筆描好熒光帶，開(kāi)始刮板。 帶好口罩很重要，小編是用平頭雕刻筆刀刮板的，非常好用。另外非常重要的是，在確定得到所需產(chǎn)物之前，不要輕易丟棄制備板。

    洗脫：刮好的硅膠，量少的話，可以隔著稱量紙用試管搟碎。量多的話，直接裝到自封袋里面隨便蹂躪，直到成粉末為止。粉末狀的硅膠樣品的洗脫，大部分人是直接加溶劑泡出來(lái)。但小編用的是，把硅膠粉直接裝到柱子（有底層砂芯的那種）里，上層鋪一薄薄的石英砂，直接像過(guò)柱子一樣在上層加溶劑壓出來(lái)，這種方法的好處就是，對(duì)于溶解性不好的樣品也可以 用相對(duì)較少的溶劑洗快速洗出產(chǎn)品。加入溶劑洗脫的時(shí)候可以隨時(shí)點(diǎn)板看產(chǎn)品是否已經(jīng)*洗出。 盡量選擇溶解度好并且極性小的溶劑，通?？捎枚燃淄榛蛘咭宜嵋阴?，如果化合物溶解度較差時(shí)，也可選用二氯甲烷：甲醇10：1的混合溶劑進(jìn)行洗脫，防止溶解過(guò)多硅膠，洗脫劑避免加入過(guò)多的甲醇。

制備色譜