金屬螯合高流速瓊脂糖微球（Chelating Bio-sep 6FF）

                    產(chǎn)品說明書

金屬螯合高流速瓊脂糖微球（Chelating Bio-sep 6FF）是將次氨基三乙酸基鍵合在6FF高流速瓊脂糖微球上，再螯合金屬離子Zn⁺²或Ni⁺²形成的一種親和層析介質(zhì)。廣泛用于生物制藥和生物工程下游蛋白質(zhì)、核酸及多肽的制備。

1.外觀：本品為白色球狀凝膠,無嗅、無味、無肉眼可見雜質(zhì)。

2.理化指標(biāo)

3．包裝：產(chǎn)品以聚胺酯瓶密封包裝，外貼標(biāo)簽，注明“品名、體積、顆粒大小、保質(zhì)期、批號、生產(chǎn)日期、生產(chǎn)單位及地址” 等內(nèi)容。所選用的包裝應(yīng)有利于保證產(chǎn)品質(zhì)量、方便運(yùn)輸和貯存。

4. 運(yùn)輸：運(yùn)輸中應(yīng)避免日曬、雨淋、重壓，嚴(yán)禁與有毒、有害物品混運(yùn)。

5. 貯存：產(chǎn)品應(yīng)密封貯存在4℃~30℃（保存溶液為20% 乙醇），通風(fēng)、干燥、清潔的地方。不能冷凍。用過的柱子貯存在4℃（20% 乙醇）。

6.保質(zhì)期：5年。

7.應(yīng)用：螯合瓊脂糖微球是一種親和層析介質(zhì)，利用樣品中組分中的組氨酸等氨基酸殘基與金屬離子的親和吸附進(jìn)行分離。用于生物大分子的純化分離。

下面簡要介紹介質(zhì)的使用過程。

7.1 裝柱

⑴讓所有的材料和試劑達(dá)到室溫。配制初始緩沖液（平衡液）和洗脫緩沖液。

 ⑵根據(jù)柱子大小取所需量的凝膠，清洗掉20%乙醇，抽干，用緩沖液（按凝膠：緩沖液=3：1的比例）配成勻漿。勻漿作脫氣處理。

⑶將柱內(nèi)及柱子底端用水或緩沖液潤濕并保持一小段液位（液面略高于濾膜），務(wù)必使底端無氣泡。

⑷  用玻璃棒引導(dǎo)勻漿沿著柱內(nèi)壁一次性倒入柱內(nèi)，注意勿使產(chǎn)生氣泡。打開柱子出液口，使凝膠在柱內(nèi)自由沉降，連結(jié)好柱子頂端柱頭。

⑸ 打開蠕動泵，讓緩沖液用使用時流速的1.33倍的流速流過，使柱床穩(wěn)定。用2~3倍柱體積的緩沖液平衡柱子。

7.2螯合金屬離子

本介質(zhì)可以根據(jù)需要，螯合不同的金屬離子，如Zn⁺²、Ni⁺²或Cu⁺²等。Cu⁺²與蛋白質(zhì)結(jié)合較強(qiáng)，某些蛋白質(zhì)只與Cu⁺²結(jié)合；Zn⁺²與蛋白質(zhì)結(jié)合較弱，可進(jìn)行選擇性洗脫，得到目標(biāo)產(chǎn)品；Ni⁺²可選擇性地與帶組氨酸的蛋白質(zhì)結(jié)合。（用戶可自行螯合，也可選擇購買螯合了離子的介質(zhì)）

在pH值偏酸性的條件下，讓過量含金屬離子的可溶性鹽溶液緩慢地流過柱子，金屬離子即被螯合在柱子上。

7.2平衡：讓平衡緩沖液以一定流速流過柱子，到流出液電導(dǎo)和pH不變。

7.3上樣

⑴樣品用平衡液配制，常用NaOAC 或PBS緩沖液，pH5.5~8.5。渾濁的樣品要離心和過濾后上樣。

⑵一般情況是讓目標(biāo)產(chǎn)品結(jié)合在柱子上，用平衡液洗去雜質(zhì)，再選擇一種洗脫液洗下目標(biāo)產(chǎn)品。

⑶介質(zhì)對樣品組分吸附的程度取決于樣品的性質(zhì)、金屬離子種類和流動相的性質(zhì)。

7.4洗脫

洗脫一般有兩種方式：一是減小pH值，大多數(shù)蛋白質(zhì)在pH 6到4的范圍內(nèi)可被洗下來；二是用一種競爭試劑，將蛋白質(zhì)從柱子上置換下來，如用咪唑、組氨酸或氯化銨。用競爭試劑咪唑或減小pH值的洗脫洗下蛋白質(zhì)，金屬離子仍然在柱子上；若用競爭試劑組氨酸或氯化銨洗脫洗下蛋白質(zhì)，會將金屬離子和蛋白質(zhì)的復(fù)合物一起洗下來。

洗脫常用增加競爭試劑或減小pH的分段洗脫或梯度洗脫。如0.05mol/L的PBS中含0.01~0.5mol/L的咪唑，做分段洗脫。

7.5再生

若金屬離子未流失，再生后接著用結(jié)合蛋白的平衡液洗到平衡，可再次使用。若金屬離子已流失或?yàn)榱吮ｋU起見，要重新做螯合金屬離子的7.2操作。若要換掉金屬離子，可用EDTA溶液除去現(xiàn)在螯合的金屬離子，再做新離子的7.2操作。

若有失活蛋白質(zhì)或脂類物質(zhì)在再生時洗不掉，可用在位清洗（CIP）除去。

7.6 在位清洗

⑴ 對于以離子鍵結(jié)合上去的蛋白，可以用2M Nacl去除。

⑵ 對沉淀蛋白、對以疏水性結(jié)合的蛋白或脂蛋白類，可用1M NaOH 去除。

⑶ 對強(qiáng)疏水性結(jié)合的蛋白、脂蛋白類等，用4~10倍柱體積的70%乙醇或30%異丙醇清洗，但要注意有機(jī)溶劑的濃度以梯度的方式逐漸增加，否則容易產(chǎn)生氣泡。

清洗完畢后，用至少3倍緩沖液平衡柱子。

7.7注意：在裝柱、使用和保存柱子的時候，要避免柱子流干，氣泡進(jìn)入。

7.8消毒：用0.5~1M NaOH室溫下洗8~10倍柱體積，初始緩沖液平衡柱子。

7.9滅菌：置介質(zhì)于高壓滅菌鍋中120℃下20分鐘。