嘔吐毒素（Deoxynivalenol）ELISA檢測(cè)試劑盒
（貨號(hào)：MD200）

特別提醒：本試劑盒有兩種標(biāo)準(zhǔn)液，MAIZE嘔吐毒素標(biāo)準(zhǔn)液用于測(cè)定玉米占比大的樣品，其他樣品采用嘔吐毒素標(biāo)準(zhǔn)液，如果同時(shí)檢測(cè)大量不同種類樣品（包括玉米），采用嘔吐毒素標(biāo)準(zhǔn)液。

本試劑盒用于定量檢測(cè)樣本中嘔吐毒素殘留。

檢測(cè)樣本：谷物、飼料

樣本前處理：

-谷物（玉米、小麥）和飼料：研磨、甲醇-水溶液提取、過(guò)濾、稀釋（可選）；

-硬質(zhì)小麥：研磨、水提取、離心、稀釋

分析時(shí)間：20分鐘（不包括樣本前處理時(shí)間）

檢測(cè)限：

-玉米、小麥和飼料：0.04ppm

-硬質(zhì)小麥：0.12ppm

特異性：交叉反應(yīng)率（%）

1. 檢測(cè)原理

本試劑盒在預(yù)包被特異性嘔吐毒素抗體的微孔內(nèi)進(jìn)行。將酶標(biāo)嘔吐毒素和標(biāo)準(zhǔn)品或樣本在預(yù)混合孔混合后轉(zhuǎn)移到包被嘔吐毒素抗體的微孔，*次孵育時(shí)，標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本中的嘔吐毒素和酶標(biāo)嘔吐毒素競(jìng)爭(zhēng)微孔上的嘔吐毒素抗體結(jié)合位點(diǎn)，洗板除掉所有未結(jié)合的酶標(biāo)嘔吐毒素或自由嘔吐毒素分子。然后加入一定量顯色底物反應(yīng)以檢測(cè)酶活性。加終止液終止反應(yīng)，450nm波長(zhǎng)酶標(biāo)儀檢測(cè)，標(biāo)準(zhǔn)品或樣品中的嘔吐毒素濃度與吸收光強(qiáng)度成反比。

2.試劑盒組成
微孔板：96孔，預(yù)包被嘔吐毒素抗體。板條可拆開(kāi)單獨(dú)使用。

預(yù)混合板：空白，未包被抗體。

MAIZE嘔吐毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液：5瓶，各1.5ml，濃度分別為：0ppm，0.04 ppm，0.25ppm，1.25 ppm，5 ppm。

嘔吐毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液：5瓶，各1.5ml，濃度分別為：0ppm，0.04 ppm，0.25ppm，1.25 ppm，5 ppm。

酶偶聯(lián)物：1瓶，14ml。

10X濃縮洗液：1瓶，50ml。

顯色液：1瓶，15ml。

終止液：1瓶，9ml。

3.需要使用但試劑盒不提供的試劑和設(shè)備
-天平
-甲醇（小麥、玉米、飼料）

-蒸餾水或去離子水

- NaCl（小麥、玉米、飼料）

-研磨器

-搖床（可選）

-離心機(jī)或?yàn)V紙

-恒溫箱

-氮吹儀

-20-200μl、100-1000μl移液器及吸頭
-20-300μl多道移液器及吸頭
-含450nm波長(zhǎng)的酶標(biāo)儀

4.注意事項(xiàng)
-僅用于體外檢測(cè)。
-一些試劑內(nèi)含防腐劑；終止液內(nèi)含有硫酸，具有腐蝕性；酶偶聯(lián)物對(duì)身體有害。
-小心操作，避免試劑接觸皮膚、眼睛和粘膜。

5.操作和存儲(chǔ)說(shuō)明
-2-8°C冷藏保存，切勿冷凍。
-將未用完的板條用試劑盒提供的鋁箔袋重新密封。
-切勿使用過(guò)期產(chǎn)品。
-不同批次試劑盒內(nèi)的成分不能混用。
-請(qǐng)使用試劑盒內(nèi)提供的說(shuō)明書。

6.樣本前處理步驟

6.1小麥、玉米和飼料

-將樣本混合均勻并充分研磨；

-稱取50g研磨樣本，并加入10g NaCl，再加入250ml 70%甲醇溶液。可選方案：稱取5g研磨樣本，并加入1g NaCl，再加入25ml 70%甲醇溶液。

-充分振蕩3分鐘。

-過(guò)濾樣本并收集濾液。用于檢測(cè)的樣本濃度范圍應(yīng)為0.04-5ppm。

-如果樣本濃度>5ppm，用70%甲醇溶液將樣本稀釋5倍，使?jié)舛确秶鸀?.2-25ppm。

建議樣本的稱取量為50g，以得到更好結(jié)果。

6.2硬質(zhì)小麥

-將樣本混合均勻并充分研磨；

-稱取50g研磨樣本，加入10g純氯化鈉，再加入250ml70%甲醇溶液；可選方案：稱取5g研磨樣本，加入1g氯化鈉后再加入25ml 70%甲醇溶液。

-充分搖晃15分鐘。注意：建議用手搖晃或溫和提取系統(tǒng)。也可以使用磁力攪拌器、振蕩器或攪拌機(jī)，但結(jié)果會(huì)偏高。

-過(guò)濾樣本并收集濾液。注意：過(guò)濾過(guò)程會(huì)很慢，建議過(guò)濾前讓樣本先沉淀。作為可選方法，建議在3500g離心力下離心5分鐘，收集上清液。

-用*甲醇將上清液稀釋3倍（1+2）（例如：100μl上清液+200μl *甲醇）。用于檢測(cè)的樣本濃度范圍應(yīng)為0.12-15ppm。

-如果樣本濃度>5ppm，用70%甲醇溶液將樣本稀釋5倍，使?jié)舛确秶鸀?.6-75ppm。

建議樣本的稱取量為50g，以使得到更具代表性的樣本。

7．工作溶液準(zhǔn)備

嘔吐毒素標(biāo)準(zhǔn)品：即用；

酶偶聯(lián)物：即用；

洗液：用蒸餾水1：10稀釋（1+9）。注意：如果出現(xiàn)結(jié)晶，將溶液置于室溫并攪拌直至結(jié)晶*溶解。

稀釋后的洗液在室溫放置24小時(shí)內(nèi)有效，2-8°C放置兩周內(nèi)有效。

顯色液：即用。顯色液對(duì)光敏感，應(yīng)避免光直射，避光保存。

終止液：即用。

8.檢測(cè)步驟

8.1檢測(cè)前注意事項(xiàng)

-檢測(cè)前將所有試劑室溫放置1小時(shí)；

-使用后立即將所有試劑放置于2-8°C；

-不得改變檢測(cè)程序；

-不得延長(zhǎng)或縮短孵育時(shí)間；

-孵育溫度不得高于25°C或低于18°C；

-孵育過(guò)程中不得晃動(dòng)酶標(biāo)板；

-使用精準(zhǔn)的移液器及吸頭；

-一旦開(kāi)始實(shí)驗(yàn)，不要間斷地完成所有步驟，不要讓微孔干透；

-ELISA方法結(jié)果的再現(xiàn)性很大程度取決于洗板過(guò)程的效率和*性，要按照介紹的程序洗板；

-為避免交叉污染，加不同樣品和標(biāo)準(zhǔn)品時(shí)要更換移液器吸頭；

-不得讓吸頭接觸到微孔內(nèi)的液體或者微孔內(nèi)表面；

-孵育時(shí)要避免光直射。建議孵育時(shí)用封板膜封板。

8.2檢測(cè)步驟

1.計(jì)算需要用到的微孔數(shù)量，標(biāo)記zui大光吸收值孔、標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔的位置。注意要考慮到都要做重復(fù)。取出需要的板條，并將未使用的板條重新用鋁箔袋密封。準(zhǔn)備同等數(shù)量的預(yù)混合板條。

2.每個(gè)預(yù)混合孔加100μl酶偶聯(lián)物。

3.將標(biāo)準(zhǔn)品、樣本加50μl到對(duì)應(yīng)預(yù)混合孔。標(biāo)準(zhǔn)品和樣本溶液含高濃度甲醇，因此加入微孔前用移液器將溶液反復(fù)吹打幾次。

4.用移液器將預(yù)混合孔內(nèi)溶液混勻（上下吹打3次），并立即吸取100μl到對(duì)應(yīng)包被嘔吐毒素抗體的微孔。注意：吸取不同微孔溶液時(shí)，要更換吸頭以避免交叉污染。

5.室溫孵育10分鐘。不得延長(zhǎng)孵育時(shí)間，孵育時(shí)不要晃動(dòng)微孔板。

6.洗板順序

-孵育后，倒掉孔內(nèi)液體；

-將微孔加滿工作濃度洗滌液，然后倒掉洗滌液；

-用力上下在吸水紙上拍板，將微孔內(nèi)液體*拍干。

重復(fù)洗滌過(guò)程3次。

在干凈的吸水紙上拍板，拍干微孔內(nèi)的液體。但不可使微孔干透。

7.顯色：用多道移液器加100μl顯色液到微孔，來(lái)回晃動(dòng)數(shù)秒鐘。

8.室溫避光孵育10分鐘。

9.用多道移液器加50μl終止液到各孔。來(lái)回晃動(dòng)數(shù)秒鐘充分混勻。

10.在1小時(shí)內(nèi)，用酶標(biāo)儀450nm波長(zhǎng)讀數(shù)。

9. 計(jì)算結(jié)果

-計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的平均吸光值；

-用計(jì)算得到的平均吸光值分別除以0標(biāo)準(zhǔn)品的吸光值并乘以100；

標(biāo)準(zhǔn)品的吸光度值（或樣品）

---------------------------- X100= (%)吸光度值

0標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值 (Bo )

-以標(biāo)準(zhǔn)品濃度值（ng/ml）的半對(duì)數(shù)值為橫坐標(biāo)，B/B0值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；

-將樣本的B/B0值帶入校準(zhǔn)曲線，得到相應(yīng)的濃度值；

-要得到樣本中嘔吐毒素的濃度值，還需要將從校準(zhǔn)曲線讀到的濃度乘以相應(yīng)樣本的稀釋倍數(shù)。

-小麥、玉米和飼料：由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度已經(jīng)考慮了樣本稀釋倍數(shù)，從標(biāo)準(zhǔn)曲線讀到的濃度值即為樣本中嘔吐毒素的濃度。

-硬質(zhì)小麥：稀釋倍數(shù)為3。

-所有樣本：如果提取過(guò)程中進(jìn)一步稀釋5倍以得到更大濃度范圍，則結(jié)果需要再乘以稀釋倍數(shù)5.

10．樣品標(biāo)準(zhǔn)曲線示例

11.結(jié)果評(píng)價(jià)

計(jì)算出結(jié)果后，還需要驗(yàn)證檢測(cè)效果。通過(guò)將得到的結(jié)果和說(shuō)明書提供的技術(shù)參數(shù)比較驗(yàn)證。如果結(jié)果與參數(shù)不符，請(qǐng)檢測(cè)試劑盒的有效期、讀取吸光值使用的波長(zhǎng)、以及操作過(guò)程是否正確。如果不是操作錯(cuò)誤，請(qǐng)的。

12.試劑盒參數(shù)

13．免責(zé)聲明

出現(xiàn)陽(yáng)性結(jié)果時(shí)，必須用確證方法對(duì)樣本檢測(cè)。TECNA公司不承擔(dān)任何因?yàn)槭褂谜咤e(cuò)誤使用試劑盒造成的損失。

http://www.yanqiwan。。ｃｏｍ