*M1 ELISA檢測試劑盒
（貨號：MA440）

本試劑盒用于定量檢測牛奶樣本中*M1殘留。

檢測樣本：原奶、奶粉

樣本前處理：

-原奶：2-8°C冷藏，離心

-奶粉：稀釋

分析時間：75分鐘（不包括樣本前處理時間）

檢測限：

-原奶：0.005ppb

-奶粉：0.05ppb

特異性：交叉反應(yīng)率（%）

1. 檢測原理

本試劑盒在預(yù)包被特異性*M1抗體的微孔內(nèi)進行。將*M1標準品和樣本加入微孔，*次孵育時，自由的*M1分子和*M1抗體結(jié)合，洗板除掉所有未結(jié)合的物質(zhì)。加入*-HRP偶聯(lián)物進行第二次孵育，偶聯(lián)物封閉所有未*次孵育時未結(jié)合的抗體結(jié)合位點，然后加入一定量顯色底物反應(yīng)以檢測酶活性。加終止液終止反應(yīng)，450nm波長酶標儀檢測，標準品或樣品中的*M1濃度與吸收光強度成反比。

2.試劑盒組成
微孔板：96孔，預(yù)包被*M1抗體。板條可拆開單獨使用。

*M1標準溶液：7瓶，各1.5ml，濃度分別為：0ppt，5 ppt，10 ppt，25 ppt，50 ppt，100 ppt，250 ppt。

酶偶聯(lián)物：1瓶，250ul濃縮酶偶聯(lián)物。

酶偶聯(lián)物稀釋液：1瓶，20ml。

20X濃縮洗液：1瓶，50ml。

顯色液：1瓶，15ml。

終止液：1瓶，9ml。

3.需要使用但試劑盒不提供的試劑和設(shè)備
-蒸餾水

-離心機，是冷凍離心機。

-20-200μl、100-1000μl移液器及吸頭
-20-300μl多道移液器及吸頭
-含450nm波長的酶標儀

4.注意事項
-僅用于體外檢測。
-一些試劑內(nèi)含防腐劑；終止液內(nèi)含有硫酸，具有腐蝕性；酶偶聯(lián)物對身體有害。
-小心操作，避免試劑接觸皮膚、眼睛和粘膜。
 

5.操作和存儲說明
-2-8°C冷藏保存，切勿冷凍。
-將未用完的板條用試劑盒提供的鋁箔袋重新密封。
-切勿使用過期產(chǎn)品。
-不同批次試劑盒內(nèi)的成分不能混用。
-請使用試劑盒內(nèi)提供的說明書。

6.樣本前處理步驟

6.1原奶

-必須在擠奶后24小時內(nèi)檢測，否則必須用*或類似物做穩(wěn)定處理。

-2-8°C預(yù)冷樣本，并將樣本在2-8°C、離心力3000g離心10分鐘。

-分離除去脂肪。

-所得脫脂奶直接用于檢測。

-如果樣本中*M1濃度在10-500ppt范圍，用樣本稀釋液（MA444）將樣本2倍稀釋，以使樣本的*M1濃度達到有效檢測范圍。從標準曲線所讀值乘以稀釋倍數(shù)2為樣本中的zui終濃度值。

-如果樣本中*M1濃度在25-1250ppt范圍，用樣本稀釋液（MA444）將樣本5倍稀釋，以使樣本的*M1濃度達到有效范圍。從標準曲線所讀值乘以稀釋倍數(shù)5為樣本中的zui終濃度值。

-如果樣本中*M1濃度在10-500ppt范圍，用樣本稀釋液（MA444）將樣本10倍稀釋，以使樣本的*M1濃度達到有效范圍。從標準曲線所讀值乘以稀釋倍數(shù)10為樣本中的zui終濃度值。

6.2奶粉

-稱取10g奶粉，用蒸餾水定容至100ml。

-搖晃直至奶粉*溶解。樣本稀釋倍數(shù)為10.

7．工作溶液準備

*M1標準品：即用（使用前輕搖混勻）；

酶偶聯(lián)物：注意，為了收集到管內(nèi)所有酶偶聯(lián)物，使用前低速離心數(shù)秒鐘。計算當次實驗的需要量，用酶稀釋液將濃縮酶偶聯(lián)物1/100稀釋（例如，20ul濃縮酶偶聯(lián)物+1980ul酶稀釋液）。稀釋混勻過程不得劇烈震蕩。每次吸取濃縮酶偶聯(lián)物的量不得少于20ul。

洗液：用蒸餾水1：20稀釋（1+19）。注意：如果出現(xiàn)結(jié)晶，將溶液置于室溫并攪拌直至結(jié)晶*溶解。

稀釋后的洗液在室溫放置24小時內(nèi)有效，2-8°C放置兩周內(nèi)有效。

顯色液：即用。顯色液對光敏感，應(yīng)避免光直射，避光保存。

終止液：即用。

酶稀釋液：即用

8.檢測步驟

8.1檢測前注意事項

-檢測前將所有試劑室溫放置1小時；

-使用后立即將所有試劑放置于2-8°C；

-不得改變檢測程序；

-不得延長或縮短孵育時間；

-孵育溫度不得高于25°C或低于18°C；

-孵育過程中不得晃動酶標板；

-使用精準的移液器及吸頭；

-一旦開始實驗，不要間斷地完成所有步驟，不要讓微孔干透；

-ELISA方法結(jié)果的再現(xiàn)性很大程度取決于洗板過程的效率和*性，要按照介紹的程序洗板；

-為避免交叉污染，加不同樣品和標準品時要更換移液器吸頭；

-不得讓吸頭接觸到微孔內(nèi)的液體或者微孔內(nèi)表面；

-孵育時要避免光直射。建議孵育時用封板膜封板。

8.2檢測步驟

1.計算需要用到的微孔數(shù)量，標記zui大光吸收值孔、標準品孔和樣本孔的位置。注意要考慮到都要做重復(fù)。取出需要的板條，并將未使用的板條重新用鋁箔袋密封。準備同等數(shù)量的預(yù)混合板條。

2.加入100ul各標準品/樣本到相應(yīng)微孔，輕搖混勻后封板膜封板。

3.室溫孵育45分鐘。不的延長次孵育時間，不能使用自動振蕩器。

4. 洗板

-孵育后，倒掉孔內(nèi)液體；

-將微孔加滿工作濃度洗滌液，然后倒掉洗滌液；

-用力上下在吸水紙上拍板，將微孔內(nèi)液體*拍干。

重復(fù)洗滌過程4次。

在干凈的吸水紙上拍板，拍干微孔內(nèi)的液體。但不可使微孔干透。

5.用多道移液器，每孔加入100ul酶偶聯(lián)物溶液。來回輕搖混勻并蓋封板膜。

6.孵育15分鐘。

7.重復(fù)步驟4洗板。

8.顯色：用多道移液器加100μl顯色液到微孔，來回晃動數(shù)秒鐘。

9.室溫避光孵育15分鐘。

10.用多道移液器加50μl終止液到各孔。來回晃動數(shù)秒鐘充分混勻。

10.在1小時內(nèi)，用酶標儀450nm波長讀數(shù)。

9. 計算結(jié)果

-計算標準品和樣品的平均吸光值；

-用計算得到的平均吸光值分別除以0標準品的吸光值并乘以100；

標準品的吸光度值（或樣品）

---------------------------- X100= (%)吸光度值

0標準的吸光度值 (Bo )

-以標準品濃度值（ng/ml）的半對數(shù)值為橫坐標，B/B0值為縱坐標繪制標準曲線；

-將樣本的B/B0值帶入校準曲線，得到相應(yīng)的濃度值；

-要得到樣本中*M1的濃度值，還需要將從校準曲線讀到的濃度乘以相應(yīng)樣本的稀釋倍數(shù)。

10．樣品標準曲線示例

11.結(jié)果評價

計算出結(jié)果后，還需要驗證檢測效果。通過將得到的結(jié)果和說明書提供的技術(shù)參數(shù)比較驗證。如果結(jié)果與參數(shù)不符，請檢測試劑盒的有效期、讀取吸光值使用的波長、以及操作過程是否正確。如果不是操作錯誤，請的。

12.試劑盒參數(shù)

13．免責聲明

出現(xiàn)陽性結(jié)果時，必須用確證方法對樣本檢測。TECNA公司不承擔任何因為使用者錯誤使用試劑盒造成的損失。