簡介：

產(chǎn)品編號：SJH-033274

產(chǎn)品名稱：科研用小鼠中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶(NE)elisa試劑盒

英文名稱：Mouse neutrophil elastase,NE ELISA Kit

檢測樣本：血清、血漿細(xì)胞上清液、灌洗液。

檢測方法：雙抗夾心法

樣本體積：50-100ul

規(guī)    格：48T/96T

產(chǎn)    地：中國·青島

產(chǎn)    地：國產(chǎn)/進(jìn)口

保存條件：2-8℃下,可放置6個(gè)月。

產(chǎn)品用途：僅用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床診斷

保存條件：2-8℃環(huán)境中遮光保存。

其他品牌：

試劑類：SIGMA、AMERSCO、TCI、TRC、美國中草藥

血 清：GIBCO、HYCLONE、四季青、MRC

抗 體：ABCAM、SANTA、CST、BD、華美、RD

在售的科研用小鼠中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶(NE)elisa試劑盒的產(chǎn)品優(yōu)勢:

1、本品采用天然抗體包被而成，具有特異性強(qiáng)、靈敏度高、操作簡便等特點(diǎn)。

2、部分指標(biāo)產(chǎn)品采用進(jìn)口原裝抗體包被，質(zhì)量放心可靠。

3、可提供免費(fèi)打代測服務(wù)，山東省內(nèi)可上門取樣。

4、一次購買十盒或一個(gè)月累計(jì)購買十盒可享受經(jīng)銷商提貨價(jià)。

5、可為 自測可戶提供全程。

操作舉例：

科研用小鼠中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶(NE)elisa試劑盒ELISA的種類很多，不同ELISA的具體操作過程不*相同，但是基本過程是*的。下面以簡潔競爭ELISA測定黃曲霉毒素B1為例，對ELISA的具體操作過程敘述如下。

    抗原包被（antigen coating)將AFB1與牛許晴白蛋白（BSA)的練街舞AFB1-BSA（也可以是卵清蛋白的練街舞AFB1-OV)溶解于0.1mol/L pH9.5的碳酸鹽緩沖液中獎(jiǎng)溶液加入酶標(biāo)板的微孔內(nèi)，通常每孔加200ul，4℃放置過頁，去除恢復(fù)至室溫，傾去微孔內(nèi)溶液（包被液），已含有0.05%的TWEEN-20的PH7.0、0.05mol/L磷酸緩沖溶液生理鹽水(PBST)滿孔洗滌3次，每次5min，控干，即得到包被有AFB1-BSA的酶標(biāo)板。在這個(gè)過程中AFB1-BSA通過物理吸附包被（粘附）在酶標(biāo)板微孔的內(nèi)壁上，沒有包被的抗原被洗滌去除。

    包被抗原的濃度對ELISA的測定結(jié)果由較大的影響，濃度過高或過低都會(huì)影響測定結(jié)果，如下圖是不同包被濃度時(shí)，競爭ELISA的抑制曲線。在圖中可以看出，包被濃度對靈敏度的影響較大，當(dāng)包被濃度為5ug/ml時(shí)，靈敏度（zui小檢出量）達(dá)1.57ng/ml,其他濃度的靈敏度都比該濃度的差，這說明5ug/ml是叫合適的包被濃度

從宏觀上看，包被濃度無論是過高還是過低都表現(xiàn)為靈敏度差，但是從微觀上分析，他們的情況是不同的，低包被濃度時(shí)，包被抗原的量不足，微孔內(nèi)吸附的抗原量少，可供抗體結(jié)合的抗原決定簇少，從而影響靈敏度高；二高濃度時(shí)包被抗原的量過多，微孔內(nèi)吸附的抗原包被抗原進(jìn)一步和抗體結(jié)合，降低了靈敏度，因此只有合適的包被抗原濃度，才能得到的靈敏度。這種關(guān)系見下圖

    科研用小鼠中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶(NE)elisa試劑盒的封阻 所謂封阻是指酶標(biāo)板被抗原包被后，在微孔中加入一定濃度BSA、OV、明膠或脫脂牛奶等溶液以封阻微孔內(nèi)沒有被抗原包被的空襲，避免抗體非特異性吸附于這些空襲，以提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性，常用的封阻劑包括BSA、OV、明膠和脫脂奶等，其中以脫脂牛奶較為便宜，而且封阻效果和其他幾種封阻劑沒有明顯的差別。

    抗原抗體競爭反應(yīng) 在酶標(biāo)板的每個(gè)微孔中加入一定量的適當(dāng)稀釋度的抗體（抗血清），同時(shí)分別加入一定量的準(zhǔn)溶液用于做標(biāo)準(zhǔn)曲線，混勻，37℃保溫1-2H，包被在酶標(biāo)板上的固定抗原（AFB1-BSA)和添加的AFB1標(biāo)準(zhǔn)品或樣品抽提液中的AFB1游離抗原競爭抗體的結(jié)合位點(diǎn)，PBST洗滌扣干3次，游離的抗原抗體符合無被洗滌去除。

    酶標(biāo)二抗與抗原抗體復(fù)合物的反應(yīng) 將一定量的適當(dāng)稀釋的酶標(biāo)二抗溶液加入個(gè)反應(yīng)孔，37℃保溫1-2h，酶標(biāo)二抗和抗原抗體符合無反應(yīng)，形成抗原-抗體-酶標(biāo)二抗的復(fù)合物固定在酶標(biāo)板上，PBST洗滌扣干5次，將有力多余的酶標(biāo)二抗去除。

    底物顯色反應(yīng)和吸光值的測定 每孔加反應(yīng)底物100ul（40mg臨本二胺溶于100ml、PH5.0/0.2mol/L檸檬酸0.1mol/l磷酸氫鈉緩沖溶液，加入150ul H2O2,現(xiàn)配現(xiàn)用，37℃保溫保濕，避光反應(yīng)30min，每孔加50ul 2mol/L,H2SO4終止反應(yīng)，5min后，以酶聯(lián)免疫測定儀于490nm測吸光度。

    科研用小鼠中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶(NE)elisa試劑盒Elisa競爭抑制曲線 以AFB1標(biāo)準(zhǔn)誤溶液中的AFB1的濃度對數(shù)為橫坐標(biāo)，以不同AFB1濃度所對應(yīng)的吸光值和AFB1濃度為零時(shí)吸光值的比值的百分?jǐn)?shù)（稱為競爭抑制率）為縱坐標(biāo)，繪制ELISA競爭抑制曲線，根據(jù)樣品抽提液的吸光值，利用競爭抑制曲線，計(jì)算出樣品中AFB1的含量，上述ELISA的操作過程

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