微型高效赭曲霉毒素A免疫親和純化富集柱

                                                 使用說明書

用途                                                             

我所通過合作，應(yīng)用*進(jìn)技術(shù)研制的微型高效赭曲霉毒素A免疫親和純化富集柱性能穩(wěn)定(回收率92%)、可以重復(fù)使用、吸附容量大（達(dá)到52ug/ml,）；吸附靈敏度（zui低富集）達(dá)到0.1ng/ml。

此免疫親和柱可選擇性吸附樣品液中的赭曲霉毒素A，從而對赭曲霉毒素A樣品起到特異性純化和富集的作用。樣品過柱后的洗脫液既可結(jié)合ELISA測試盒或膠體金試紙條進(jìn)行檢測，也可聯(lián)合液相色譜進(jìn)行精確定量。親和色譜柱的使用可以改善信噪比，可提高檢測方法的準(zhǔn)確度。

赭曲霉毒素A                                                       

赭曲霉毒素A( Ochratox in A, OA) 是由曲霉屬和青霉屬的某些菌種產(chǎn)生的有毒代謝產(chǎn)物, 是一種具有強腎臟毒和肝臟毒的真菌毒素，并有致畸、致突變和致癌作用。OA廣泛存在于各種食物中，可污染糧食谷物、蔬果、調(diào)味料、咖啡、啤酒、葡萄酒及干果等多種農(nóng)作物和食品，嚴(yán)重危害人體健康。

富集原理                                                         

親和柱富集的原理是抗原抗體反應(yīng)。樣品經(jīng)過提取、過濾、稀釋，然后緩慢的通過赭曲霉毒素A免疫親和柱，樣品中的赭曲霉毒素A與偶聯(lián)在瓊脂糖珠上的抗體結(jié)合，洗滌掉雜質(zhì)后，根據(jù)檢測需要選用洗脫液洗脫，收集的洗脫液可以用于儀器分析或免疫學(xué)檢測方法檢測。

產(chǎn)品包裝組成                                                      

注意事項                                                           1．親和柱在不使用時，需放置在-20℃保存，其他試劑放在2-8℃保存，并確保在有效期內(nèi)使用。

2．柱子的填料應(yīng)保持濕潤，在保存、清洗、上樣、洗脫的過程中不能出現(xiàn)填料干燥的情況。

3．在操作中，填料里盡量不要有氣泡，以免影響流速。

4．實驗完后需對所用材料、容器、設(shè)備做適當(dāng)處理。

5．洗脫液里的乙酸容易揮發(fā)，請密封保存；若乙酸揮發(fā)完，不能使用，需要重新配制。

樣品處理                                                      

植物油脂：稱取試樣50g（精確到1mg）于均質(zhì)器的攪拌杯中，加入5.0g氯化鈉和100.0mL的提取液（乙腈：水=60:40）。將攪拌杯裝于均質(zhì)器上，高速攪拌提取3min。提取液經(jīng)槽紋折疊濾紙過濾于干凈的燒杯中。準(zhǔn)確移取10.0ml濾液于50ml容量瓶中，加PBS稀釋至刻度，混合均勻，經(jīng)玻璃纖維濾紙過濾，收集濾液，用飽和Tris調(diào)節(jié)PH=7.0±0.5，待凈化。

操作程序                                                      

1．自冰箱取出免疫親和柱，在室溫（22～25℃）平衡10 min，將上方塞和下方塞子取出。上方接上已經(jīng)去掉活塞的注射器。親和柱內(nèi)含有甘油作為保護(hù)劑，使用時應(yīng)該將上方的甘油全部吸取出來。

2．清洗①：將親和柱固定好，往注射器內(nèi)加入1 mL PBS，用活塞從注射器上方輕輕按壓，使PBS勻速流出，但不要*擠壓出PBS ,注意保持柱內(nèi)填料含有液體。

3．上樣：準(zhǔn)確量取5mL（上樣量可以根據(jù)實際情況做調(diào)整）處理后的樣品液于注射器內(nèi)，用活塞加壓控制流速為1滴/2 s，棄去流出液。樣液過柱的方式有：自然流淌、手動加壓（產(chǎn)品配備的注射器）、真空泵抽濾。可根據(jù)實際情況需要選擇不同的過柱方式。

4．清洗②： 待樣品滴凈后，依次加入2 mL PBSt、2 mL PBS清洗。洗法同清洗①。

5．去掉注射器，根據(jù)后續(xù)檢測需要，選擇洗脫液A或洗脫液B其中的一種，加入0.2 mL（洗脫液總量可以根據(jù)實際情況作調(diào)整），洗脫液自然滴下，用EP管接收洗脫液（接洗脫液時，流出*滴洗脫液不要）。

6．將收集到的洗脫液轉(zhuǎn)入儀器分析或采用ELISA/膠體金檢測（用作ELISA/膠體金的收集液必須用飽和Tris調(diào)節(jié)PH=7.0±0.5）。

7．保質(zhì)期一年。

再生使用方法：依次用0.2mL的PBSt、1mL的PBS清洗親和柱，直到流出來的清洗液PH值為7左右，zui后用0.2ml的甘油保存。本微型高效免疫親和純化富集柱經(jīng)過再生處理后可以重復(fù)使用多次。