微型高效瘦肉精免疫親和純化富集柱

使用說(shuō)明書(shū)

                                                                               用途                                                                         

我所通過(guò)合作，應(yīng)用國(guó)外*技術(shù)研制的微型高效瘦肉精免疫親和純化富集柱（三聯(lián)裝：包括鹽酸克倫特羅、萊克多巴胺、沙丁胺醇），產(chǎn)品一柱多用（一支柱子可以同時(shí)純化富集鹽酸克倫特羅、萊克多巴胺、沙丁胺醇）、性能穩(wěn)定、可以重復(fù)使用吸附靈敏度（zui低富集）達(dá)到0.1ng/ml。

該免疫親和柱可選擇性吸附樣品液中的鹽酸克倫特羅、萊克多巴胺、沙丁胺醇，從而對(duì)樣品起到特異性純化和富集的作用，樣品過(guò)柱后的洗脫液可聯(lián)合液相色譜進(jìn)行精確定量，也可以結(jié)合ELISA測(cè)試盒和膠體金試紙條進(jìn)行檢測(cè)。免疫親和柱的使用可以改善信噪比，可提高檢測(cè)方法的準(zhǔn)確度。

鹽酸克倫特羅、萊克多巴胺、沙丁胺醇                                                   

鹽酸克倫特羅、萊克多巴胺、沙丁胺醇均是β-興奮劑，可以提高瘦肉率，減少脂肪沉積和促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)，被養(yǎng)殖戶或養(yǎng)殖企業(yè)作為養(yǎng)殖促進(jìn)劑非法使用。人食用了飼喂克倫特羅作為添加劑的動(dòng)物所產(chǎn)生的畜產(chǎn)品后，殘留的克倫特羅可導(dǎo)致人體肌肉震顫、心悸、神經(jīng)過(guò)敏、頭痛、目眩、惡心、嘔吐、發(fā)燒、戰(zhàn)栗等癥狀，對(duì)消費(fèi)者的健康造成*危害。因此世界許多國(guó)家現(xiàn)已明令禁止在飼料中添加克倫特羅來(lái)增加動(dòng)物的瘦肉率，畜產(chǎn)品中禁止克倫特羅含量超標(biāo)。

富集原理                                                          

親和柱富集的原理是抗原抗體反應(yīng)。樣品經(jīng)過(guò)提取、過(guò)濾、稀釋，然后緩慢的通過(guò)免疫親和柱，樣品中的鹽酸克倫特羅、萊克多巴胺、沙丁胺醇與偶聯(lián)在瓊脂糖珠上的抗體結(jié)合，洗滌掉雜質(zhì)后，根據(jù)檢測(cè)需要選用洗脫液洗脫，收集的洗脫液可以用于儀器分析或免疫學(xué)檢測(cè)方法檢測(cè)。

產(chǎn)品包裝組成                                                      

注意事項(xiàng)                                                          

1．親和柱在不使用時(shí)，需放置在-20℃保存，其他試劑放在2-8℃保存，并確保在有效期內(nèi)使用。

2．柱子的填料應(yīng)保持濕潤(rùn)，在保存、清洗、上樣、洗脫的過(guò)程中不能出現(xiàn)填料干燥的情況。

3．在操作中，填料里盡量不要有氣泡，以免影響流速。

4．實(shí)驗(yàn)完后需對(duì)所用材料、容器、設(shè)備做適當(dāng)處理。

5．洗脫液里的乙酸容易揮發(fā)，請(qǐng)密封保存；若乙酸揮發(fā)完，不能使用，需要重新配制。

樣品處理                                                          

1． 尿液

用干燥、潔凈的離心管或適當(dāng)容器采集大約10 mL尿液。尿液樣品靜置或離心后取10 mL上清上柱，如果不立即檢測(cè)，尿樣在2-8℃冷藏可保存24 h，要注意避免因變質(zhì)而造成的失效或污染。出現(xiàn)陽(yáng)性結(jié)果時(shí)應(yīng)按法定程序分瓶封裝樣品用于確證法檢測(cè)。

2． 血清

用干燥、潔凈的離心管采集大約20 mL血液，靜置2 h以上，以4000轉(zhuǎn)/分鐘以上轉(zhuǎn)速離心10 min，取10 mL上清上柱。

操作程序                                                          

1．自冰箱取出免疫親和柱，在室溫（22～25℃）平衡10 min，將上方下方塞子取出。上方接上已經(jīng)去掉活塞的注射器。親和柱內(nèi)含有甘油作為保護(hù)劑，使用時(shí)應(yīng)該將上方的甘油全部吸取出來(lái)。

2．清洗①：將親和柱固定好，往注射器內(nèi)加入1 mL PBS，用活塞從注射器上方輕輕按壓，使PBS勻速流出，但不要*擠壓出PBS ,注意保持柱內(nèi)填料含有液體。

3．上樣：準(zhǔn)確量取5mL（上樣量可以根據(jù)實(shí)際情況做調(diào)整）處理后的樣品液于注射器內(nèi)，用活塞加壓控制流速為1滴/2 s，棄去流出液。樣液過(guò)柱的方式有：自然流淌、手動(dòng)加壓（產(chǎn)品配備的注射器）、真空泵抽濾?？筛鶕?jù)實(shí)際情況需要選擇不同的過(guò)柱方式。

4．清洗②： 待樣品滴凈后，依次加入2 mL PBSt、2 mL PBS清洗。洗法同清洗①。

5．去掉注射器，根據(jù)后續(xù)檢測(cè)需要，選擇洗脫液A或洗脫液B其中的一種，加入0.2 mL（洗脫液總量可以根據(jù)實(shí)際情況作調(diào)整），洗脫液自然滴下，用EP管接收洗脫液（接洗脫液時(shí)，流出*滴洗脫液不要）。

6．將收集到的洗脫液轉(zhuǎn)入儀器分析或采用ELISA/膠體金檢測(cè)（用作ELISA/膠體金的收集液必須用飽和Tris調(diào)節(jié)PH=7.0±0.5）。

再生使用方法：依次用0.2mL的PBSt、1mL的PBS清洗親和柱，直到流出來(lái)的清洗液PH值為7左右，zui后用0.2ml的甘油保存。本微型高效免疫親和純化富集柱經(jīng)過(guò)再生處理后可以重復(fù)使用多次。