普魯士藍(lán)染色試劑盒（Perls stain）

普魯士藍(lán)染色試劑盒說(shuō)明：

含鐵血黃素（Hemosiderin）是一種血紅蛋白源性色素，為金黃色或棕黃色顆粒，因其

含鐵、金黃色，故稱為含鐵血黃素。當(dāng)紅細(xì)胞被巨噬細(xì)胞吞噬后，在溶酶體酶的作用下，血

紅蛋白被分解為不含鐵的橙色血質(zhì)和含鐵的含鐵血黃素。

Perls 普魯士藍(lán)反應(yīng)（Prussian blue reaction）又稱為含鐵血黃素染色，即經(jīng)過亞鐵氰化

鉀和稀酸處理后可以產(chǎn)生藍(lán)色，常見于吞噬細(xì)胞內(nèi)會(huì)間質(zhì)內(nèi)，主要顯示三價(jià)鐵鹽。Perls 普

魯士藍(lán)是非常經(jīng)典的組織化學(xué)反應(yīng)，是顯示組織內(nèi)三價(jià)鐵的一種敏感、傳統(tǒng)優(yōu)良的方法，其

染色原理為：亞鐵qing hua jia溶液使三價(jià)鐵離子從蛋白質(zhì)中被稀鹽酸分離出來(lái)，三價(jià)鐵與亞鐵氰

化鉀反應(yīng)，生成一種不溶解的藍(lán)色化合物即三價(jià)鐵的亞鐵氰化物普魯士藍(lán)，所以該反應(yīng)被稱

為普魯士藍(lán)反應(yīng)。三價(jià)鐵的亞鐵氰化物是一種很穩(wěn)定的化合物，在反應(yīng)后可用紅色染色劑進(jìn)

行復(fù)染，如核固紅、伊紅、中性紅等。

Perls stain 常用于顯示局部組織內(nèi)各種出血性病變，常見于吞噬細(xì)胞內(nèi)。在判斷含鐵血

黃素沉積時(shí)，用Perls 反應(yīng)可以得到證實(shí)，該染色方法可以很好的區(qū)分含鐵血黃素和其他色

素。該染色液穩(wěn)定性好、可以*保存、不易產(chǎn)生沉淀、應(yīng)用范圍廣、可以進(jìn)行復(fù)染。

普魯士藍(lán)染色試劑盒（Perls stain，伊紅法），其復(fù)染液采用伊紅染色液，也是常用的復(fù)

染液，該復(fù)染液染色時(shí)間較核固紅染色液要短。

普魯士藍(lán)染色試劑盒組成：

Perls stain A

Perls stain B

臨用前，取A1、A2 等量混合，即為試劑(A)Perls stain，不宜提前配制。、

試劑(B): 伊紅染色

液 50ml

使用說(shuō)明書

主要成分：

試劑(A): 主要由亞鐵qing hua jia、稀酸等組成。

試劑(B): 主要由伊紅、防腐劑等組成。

自備材料：

1、10%的中性福爾馬林

2、系列乙醇

3、蒸餾水

4、4%的多聚甲醛

普魯士藍(lán)染色試劑盒操作步驟（僅供參考）：

（一）石蠟切片染色

1、 切片脫蠟至水

① 二甲苯(Ⅰ) 5～10min

② 二甲苯(Ⅱ) 5～10min

③無(wú)水乙醇(Ⅰ)（可選） 3～5min

④無(wú)水乙醇(Ⅱ)（可選） 3～5min

⑤95%的乙醇 3～5min

⑥90%的乙醇 3～5min

⑦80%的乙醇 3～5min

⑧自來(lái)水或蒸餾水沖洗(Ⅰ) 1～3min

⑨自來(lái)水或蒸餾水沖洗(Ⅱ) 1～3min

2、染色

①切片入Perls stain（見注意事項(xiàng)6） 15～30min

②蒸餾水充分沖洗 5～10min

③伊紅染色液淡染細(xì)胞核 15～30s

④自來(lái)水沖洗 1～5s

3、脫水、透明、封固

①90%乙醇 10～20s

②95%乙醇(Ⅰ) 1～2min

③95%乙醇(Ⅱ) 1～2min

④ 無(wú)水乙醇(Ⅰ) 2～3min

⑤無(wú)水乙醇(Ⅱ) 2～3min

⑥ 二甲苯(Ⅰ) 2～3min

⑦二甲苯(Ⅱ) 2～3min

⑧ 二甲苯(Ⅲ) 2～3min

⑨中性樹脂封片。

（二）冰凍切片染色

1、 無(wú)需脫蠟，直接迅速用蒸餾水沖洗2～3min。

2、 染色、脫蠟、透明、封固步驟同石蠟切片的染色步驟。

（三）細(xì)胞染色

1、4%多聚甲醛固定10～20min。

2、自來(lái)水沖洗2 次，每次2min。

3、蒸餾水沖洗2 次，每次2min。

4、染色、脫蠟、透明、封固步驟同石蠟切片的染色步驟。

染.結(jié)果：

含鐵血黃素或三價(jià)鐵 藍(lán)色

細(xì)胞核、其他組織 紅色

陰性對(duì)照（可選）

取相同連續(xù)切片脫蠟至水。置于5%的草酸中，孵育2-6h 后，經(jīng)Perla stain，需要步驟

同上。結(jié)果為陰性。

普魯士藍(lán)染色試劑盒注意事項(xiàng)：

1、 切片脫蠟應(yīng)盡量干凈。

2、 組織固定常采用10%的中性福爾馬林，經(jīng)普通福爾馬林*固定后，組織會(huì)有損傷。

3、 臨用前取A1、A2 液等量混合，即為試劑（A），現(xiàn)配現(xiàn)用，不可提前配制。

4、整個(gè)操作過程中容器要干凈，避免使用金屬鐵制品，洗切片和容器時(shí)以蒸餾水為宜，因

普通水內(nèi)含鐵質(zhì)。

5、避免使用酸性固定劑，鉻酸鹽處理也會(huì)妨礙鐵的保存。

6、Perls stain 染色時(shí)，應(yīng)根據(jù)樣品情況調(diào)整著色時(shí)間。

7、 所有檢查切片都應(yīng)使用同一個(gè)陽(yáng)性對(duì)照切片,選擇適合的對(duì)照非常重要.尸檢肺組織是一

個(gè)很好的對(duì)照,包含相當(dāng)數(shù)量的鐵陽(yáng)性巨噬細(xì)胞(心衰細(xì)胞).

8、95%乙醇、90%乙醇應(yīng)經(jīng)常更換新液.

9、 冰凍切片和細(xì)胞的染色,應(yīng)根據(jù)具體情況摸索實(shí)驗(yàn)條件.

10、 為了您的健康和安全,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作.

普魯士藍(lán)染色試劑盒有效期：12個(gè)月

科研領(lǐng)域普魯士藍(lán)染色試劑盒（Perls stain）

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