全血基因組DNA提取試劑盒說明書/D1800/北京索萊寶

生產(chǎn)廠家：北京索萊寶

貨號：D1800

規(guī)格：50T/ 100T

保存：室溫(15℃-25℃) 干燥保存，復檢期12個月，2℃-8℃保存時間更長。

全血基因組DNA提取試劑盒內(nèi)容：RNase A、蛋白酶K、紅細胞裂解液、溶液A、溶液B、漂洗液、洗脫液、吸附柱、收集管、說明書；

全血基因組DNA提取試劑盒說明:

本試劑盒采用可以特異性結(jié)合DNA的離心吸附柱和*的緩沖液系統(tǒng)，提取全血基因組DNA。離心吸附柱中采用的硅基質(zhì)材料為本公司*新型材料，能夠高效、專一吸附DNA，可大限度去除雜質(zhì)蛋白及細胞中其他有機化合物。提取的基因組DNA的片段大，純度高，質(zhì)量穩(wěn)定可靠。使用本試劑盒提取的基因組DNA可用于各種常規(guī)操作，包括酶切、 PCR、文庫構(gòu)建、Southern雜交等實驗。

全血基因組DNA提取試劑盒操作步驟：

使用前請先在漂洗液和溶液B中加入無水乙醇，加入體積請參照瓶體上的標簽。所有離心步驟均為使用臺式離心機在室溫下離心。

1、樣品的處理(本產(chǎn)品適用于處理新鮮的或已經(jīng)添加抗凝劑的0.lml-1ml血液樣品)：

a、在血液樣品中加入2-3倍體積的紅細胞裂解液，充分顛倒混勻，12000rpm離心1min，小心吸去上清，沉淀應為白色或淡紅色，如果裂解不*，可重復以上述步驟一次。向沉淀中加200ul溶液A，振蕩至*混勻。

b、如果處理的血樣為禽類、鳥類、兩棲類或更低級生物的血液，其紅細胞為有核細胞，因此處理量為5-20u1，不需要再用紅細胞裂解液處理，直接加200ul溶液A，振蕩至*混勻。

2、向懸浮液中加入20ul (10mg/ml) 的RNase A，充分顛倒混勻，室溫放置10min。

3、加入20ul ( 10mg /ml ) 的蛋白酶K，充分顛倒混勻，65℃水浴消化30-60min，消化期間可顛倒離心管混勻數(shù)次，直至樣品消化*為止。

4、加入2倍體積溶液B(使用前請先檢查是否己加入無水乙醇)，充分顛倒混勻，此時可能會出現(xiàn)絮狀沉淀，不影響DNA的提取，可將溶液和絮狀沉淀都加入吸附柱中，室溫放置2min。

5、12000rpm離心2min，棄廢液，將吸附柱放入收集管中。

6、向吸附柱中加入700ul漂洗液(使用前請先檢查是否已加入無水乙醇)， 12000rpm離心1min，棄廢液，將吸附柱放入收集管中。

7、向吸附柱中加入500ul漂洗液，12000rpm離心1min，棄廢液，將吸附柱放入收集管中。

8、12000rpm離心2min，將吸附柱敞口置于室溫或50℃溫箱放置數(shù)分鐘，目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除，否則漂洗液中的乙醇會影響后續(xù)的實驗如酶切、PCR等。

9、將吸附柱放入一個干凈的離心管中，向吸附膜*懸空滴加50-200ul經(jīng)65℃水浴預熱的洗脫液，室溫放置5min，12000rpm離心1min。

10、離心所得洗脫液再加入吸附柱中，12000rpm離心2min，即可得到高質(zhì)量的基因組DNA。

全血基因組DNA提取試劑盒注意事項:

1、本試劑盒置于室溫( 15 -25℃) 干燥條件下可保存12個月，更長時間的保存可置于2 -8℃。

2、常用的血液抗凝劑有EDTA、ACD和肝素等，需注意的是，如欲制備大分子量血液基因組DNA，可優(yōu)先考慮使用ACD抗凝。一般不使用肝素抗凝，因為用肝素抗凝的血液提取的基因組DNA進行PCR擴增時，有PCR擴增抑制現(xiàn)象。

3、樣品應避免反復凍融，否則會導致提取的DNA的片段較小且提取量也下降。

4、如果試劑盒中的溶液出現(xiàn)沉淀，可在65℃水浴中重新溶解后再使用，不影響效果。

5、絕大多數(shù)哺乳動物的全血如入全血中的紅細胞無核，故在提取基因組DNA時需去除不含DNA的無核紅細胞，以免影響紅細胞裂解和DNA釋放。如果處理的血樣為禽類、鳥類、兩棲類或更低級生物的血液，其紅細胞為有核細胞，因此處理量減少為5-20ul，不需要再用紅細胞裂解液來裂解紅細胞。

6、洗脫緩沖液的體積好不少于50ul，體積過小會影響回收效率:洗脫液的pH值對洗脫效率也有影響，若需要用水做洗脫液應保證其pH值在8.0左右(可用NaOH將水的pH值調(diào)至此范圍)，pH 值低于7.0會降低洗脫效率。

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科研領域全血基因組DNA提取試劑盒

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