ANNEXIN V-FITC/PI凋亡檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書/CA1020/北京索萊寶

生產(chǎn)商：北京索萊寶

產(chǎn)品名稱：ANNEXIN V-FITC/PI凋亡檢測(cè)試劑盒

貨號(hào)：CA1020

規(guī)格：20T/50T/100T

保存：貯存于 2-8°C，復(fù)檢期為一年。建議Annexin V-FITC打開后，分裝成小份凍存于-20°C。

ANNEXIN V-FITC/PI凋亡檢測(cè)試劑盒內(nèi)容:

Annexin V-FITC

Binding Buffer

Propidium iodide(PI)

ANNEXIN V-FITC/PI凋亡檢測(cè)試劑盒說(shuō)明：

細(xì)胞凋亡是細(xì)胞的基本特征之一，在機(jī)體的胚胎發(fā)育、組織修復(fù)、內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定等方面都起到十分重要的作用。Annexin V是一種分子量為35.8 KD的Ca2+依賴性磷脂結(jié)合蛋白，能與細(xì)胞凋亡過(guò)程中翻轉(zhuǎn)到膜外的磷脂酰絲氨酸（Phosphatidylserine, PS）高親和力特異結(jié)合。FITC-Annexin V結(jié)合到凋亡細(xì)胞后，在藍(lán)色光的激發(fā)下，發(fā)出綠色熒光，區(qū)分出凋亡細(xì)胞與正常細(xì)胞。碘化丙啶（Propidium iodide，PI）是一種核酸染料，它不能穿透完整細(xì)胞膜，但對(duì)凋亡晚期細(xì)胞和死細(xì)胞的破損細(xì)胞膜能夠穿透，并使細(xì)胞核紅染。將FITC-Annexin V與PI匹配使用，可以將凋亡早期的細(xì)胞和晚期的細(xì)胞區(qū)分開來(lái)。

操作步驟: 1. 調(diào)整待測(cè)細(xì)胞的濃度為5×105-1×106個(gè)/ml。 2. 取1ml細(xì)胞，1000rpm，4℃離心10分鐘，棄上清。 3. 加入1ml預(yù)冷的PBS，輕輕震蕩使細(xì)胞懸浮，1000rpm，4℃離心10分鐘，棄上清（對(duì)于貼壁細(xì)胞，先用胰酶消化，再用PBS洗滌）。 4. 重復(fù)步驟3兩次。 5. 將細(xì)胞重懸于200μl Binding Buffer。 6. 加入10μl Annexin V-FITC和10μl PI，輕輕混勻，避光室溫反應(yīng)15分鐘 或4℃反應(yīng)30 分鐘。 7. 加入300μl Binding Buffer，在1小時(shí)內(nèi)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)。 8. 若用熒光顯微鏡檢測(cè)，將細(xì)胞混合液離心，取細(xì)胞沉淀涂片，再進(jìn)行觀察。

ANNEXIN V-FITC/PI凋亡檢測(cè)試劑盒注意事項(xiàng): 為保證得到理想的實(shí)驗(yàn)結(jié)果在使用此試劑盒之前請(qǐng)認(rèn)真閱讀該注意事項(xiàng)。 1.旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請(qǐng)短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底，避免開蓋時(shí)液體灑落。 2.Annexin V-FITC和Propidium iodide是光敏物質(zhì)，在保存與操作時(shí)請(qǐng)注意避光。 3.Propidium iodide（PI）能通過(guò)皮膚吸收，對(duì)眼睛有刺激作用。 4.在細(xì)胞洗滌的后一步，請(qǐng)盡量將上清棄凈，以免PBS殘留影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。 5.PI染色時(shí)間過(guò)長(zhǎng)有可能造成檢測(cè)的凋亡率偏高，建議首*行Annexin V-FITC染色，上機(jī)前5分鐘再加入PI染色。

6.整個(gè)操作過(guò)程動(dòng)作要盡量輕柔，勿用力吹打細(xì)胞，盡量在4℃下操作。 7.反應(yīng)完畢后請(qǐng)盡快檢測(cè)，因?yàn)榧?xì)胞凋亡是一個(gè)動(dòng)態(tài)的過(guò)程，反應(yīng)1小時(shí)后熒光強(qiáng)度就開始衰變。 8.成功的檢測(cè)凋亡受以下幾種因素的影響，如細(xì)胞類型、細(xì)胞膜上PS的密度、發(fā)生凋亡時(shí)PS翻轉(zhuǎn)的比例、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的方法、所用試劑、誘導(dǎo)凋亡的時(shí)間等，把這些影響因素進(jìn)行優(yōu)化對(duì)實(shí)驗(yàn)成功是非常必要的。 此試劑盒僅供科研使用。

相關(guān)產(chǎn)品：

P1020 1×PBS，PH7.2-7.4，0.01M

T1300 胰蛋白酶－EDTA消化液(0.25%)不含酚紅

T1350 胰蛋白酶消化液(0.25%)不含酚紅

24800 通用細(xì)胞凍存液

12100 DMEM(H)

31800 RPMI Medium 1640

CA1040 一步法TUNEL細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒(FITC)

S1056 細(xì)胞凋亡熒光Hoechst 33342-PI雙染試劑

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