聚丙烯酰胺凝膠DNA 回收試劑盒使用說明書/D1250
- 公司名稱 北京索萊寶科技有限公司
- 品牌
- 型號
- 產(chǎn)地
- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)廠家
- 更新時間 2017/2/4 13:29:48
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聚丙烯酰胺凝膠DNA 回收試劑盒使用說明書/D1250
產(chǎn)品名稱:聚丙烯酰胺凝膠DNA 回收試劑盒
貨號:D1250
規(guī)格:5T/ 20T /50T
生產(chǎn)商:北京索萊寶
聚丙烯酰胺凝膠DNA 回收試劑盒保存:室溫(15℃-25℃) 干燥保存,復(fù)檢期12 個月,2℃-8℃保存時間更長
聚丙烯酰胺凝膠DNA 回收試劑盒簡介:
本試劑盒采用可以高效、專一結(jié)合DNA 的硅基質(zhì)材料和*的緩沖液系統(tǒng),從聚丙烯酰胺凝膠上回收
DNA的 片段,同時除去蛋白質(zhì)、其它有機化合物、無機鹽離子及寡核苷酸引物等雜質(zhì)。使用本試劑盒回收的
DNA 可適用于后續(xù)各種常規(guī)操作,包括酶切、PCR、測序、文庫篩選、連接和轉(zhuǎn)化等實驗。
聚丙烯酰胺凝膠DNA 回收試劑盒操作步驟:
*次使用前請先在15ml 漂洗液中加入60ml 無水乙醇,所有離心步驟均可使用臺式離心機在室溫下離心。
1.將單一的目的DNA 條帶從聚丙烯酰胺凝膠中切下(盡量切除多余部分),放入1.5ml 離心管中,稱取重量,
用研磨杵將膠盡量擠壓碎。加入2 倍體積的溶液A 吹打混勻(每100mg 膠加入200ul 溶液A),75℃水浴
30 分鐘。
2.用1ml 的去尖吸頭吸取混合物至過濾柱中(將膠一起吸入,溶液過多時可分次加入)。13,000rpm 離心1
分鐘。將收集管中的濾出液轉(zhuǎn)入新離心管中。
3. 取六倍體積溶液B 加入原離心管中(每100mg 膠加入600ul),清洗管壁后加入過濾柱中(溶液過多時可分
次加入),顛倒過濾柱或輕輕吹打幾次混勻,13,000rpm 離心1 分鐘。將所有收集的濾出液混合。
4.將總濾出液混勻后加入吸附柱中(溶液過多時可分次加入),13,000rpm 離心30-60 秒,倒掉收集管中的廢
液,將吸附柱重新放入收集管中。
5.向吸附柱中加入600μl 漂洗液(使用前請先檢查是否已加入無水乙醇),13,000rpm 離心30-60 秒,倒掉廢
液,將吸附柱重新放入收集管中。
6.向吸附柱中加入600μl 漂洗液,13,000rpm 離心30-60 秒,倒掉廢液。
7.將離心吸附柱放回收集管中,13,000rpm 離心2 分鐘,盡量除去漂洗液。將吸附柱開蓋置于室溫1-2 分鐘,
*晾干,以防止殘留的漂洗液影響下一步的實驗。
8.將吸附柱放到一個干凈離心管中,向吸附膜中間位置懸空滴加適量65–70℃預(yù)熱的洗脫緩沖液20-30μl,室溫放置2分鐘。13,000rpm離心2分鐘收集DNA溶液。注意:①為了增加回收效率,可將得到的溶液重新加入離心吸附柱中,13,000rpm再次離心1分鐘。②洗脫緩沖液體積不應(yīng)少于20μl,體積過小影響回收效率。③洗脫液的pH值對于洗脫效率有很大影響,若用水做洗脫液應(yīng)保證其 pH 值在 7.0-8.5 之間。
9.DNA回收產(chǎn)物直接后續(xù)實驗或者-20度保存。
聚丙烯酰胺凝膠DNA 回收試劑盒注意事項:
1.電泳時好使用新的電泳緩沖液,以免影響電泳和回收效果。
2.切膠時,紫外照射時間應(yīng)盡量短,以免對DNA造成損傷。
3.本試劑盒對<50bpDNA的片段回收效率偏低(30%左右),如要回收,應(yīng)加大結(jié)合液的體積,延長吸附和洗脫的時間。
4.回收率與初始 DNA 量和洗脫體積有關(guān),初始量越少、洗脫體積越小,回收率越低
其他相關(guān)產(chǎn)品:
A1020 40%丙烯酰胺(
A1030 10%過硫酸氨
T1050 5×TBE
E1020 EB
E1027 EB 清除劑
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