神經(jīng)肽Y放免藥盒操作說明書                                                                                               NPY（HY-098） RIA   KIT   神經(jīng)肽Y（Neuropetide  NPY）是一種含有36個氨基酸殘基的多肽。廣泛分布于哺乳動物的中樞神經(jīng)系統(tǒng)。NPY可收縮血管，升高血壓，對心臟表現(xiàn)為負(fù)性肌力作用。zui近有作者證實血小板有合成NPY的能力。NPY含量與應(yīng)激反應(yīng)程度有關(guān)，當(dāng)出血性休克時，NPY釋放增加對維持全身血壓穩(wěn)定和調(diào)節(jié)器官血流量具有重要的代償作用。研究各種病理狀態(tài)血漿及血小板NPY含量與釋放的改變及其病理生理意義，對心腦血管疾病的防治具有廣闊的研究前景。 測定盒組成：      1、緩沖液一瓶。            2、分離劑（第二抗體）一瓶。      3、NPY  抗體一瓶，用前加    ml緩沖液稀釋。      4、NPY標(biāo)記一瓶，用前加     ml緩沖液稀釋。      5、NPY標(biāo)準(zhǔn)品五瓶：用前每瓶加   ml緩沖液稀釋33、100、300、600、1200pg/ml。    6、抑肽酶一瓶。      7、10%EDTA.Na2一瓶。 樣品收集：      1、取靜脈血3ml注入含10%EDTA.Na2  40ul和抑肽酶10ul（含100U/ml以上）的試管中，混勻4℃，3000轉(zhuǎn)/分 離心10分鐘，分離血漿（溶血樣品影響測定結(jié)果）。如需要可分裝2-3份保存，放-20℃可保存2個月，在-70℃以下可存放半年。 測定前，使樣本置于室溫或冷水中復(fù)融，再次4℃，3000轉(zhuǎn)/分 離心5分鐘，取上清測定。       2、組織樣品的處理：取出活組織，吸去血跡，稱重，放入0.2mol/L 1N HAC 1ml中，然后在100℃水浴中煮沸10分鐘，勻漿。4℃，3000轉(zhuǎn)/分 離心15分鐘，取上清放-20℃以下保存，測定時用PBS五倍以上稀釋，以調(diào)節(jié)PH值。另外，每種組織的樣品非特異結(jié)合（U0）可能有差異，每份標(biāo)本zui單獨做一個U0。取組織的重量視不同組織而異。       3、血漿樣品處理：實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)：有少數(shù)患者可能由于使用某些藥物或個體差異，出現(xiàn)血漿蛋白對抗原抗體反應(yīng)的影響，測定NPY值偏低，甚至為零。為排除樣品中蛋白質(zhì)的干擾，可采用簡易酸性乙醇提取法，具體步驟如下：   取血漿0.5ml+1ml酸性無水乙醇（ 100ml無水乙醇+冰乙酸1.2ml），放振蕩器上振蕩1min，4℃，3500rpm/15min  離心15min，將上清液倒入青霉素瓶，在45℃水浴鍋上蒸干（可將水浴鍋溫度調(diào)到80℃左右，鍋口上放一鋁板，鋁板上溫度約40~45℃，將青霉素瓶置于鋁板之上），大約需24小時樣品可以*干燥，干燥后將青霉素瓶加蓋，封口，放-20℃保存。     測定前，每瓶加PH7.4 PBS 0.5ml溶解，混勻，倒入塑料管中，放-20℃ 4h以上至樣品*凍結(jié)，然后取出放置4℃*溶解，取上清200ul測定用。 注：從4℃取出后，一定要輕拿輕放，千萬不要再振蕩混勻，不要在室溫放置過久，現(xiàn)加現(xiàn)取。             測定方法：本實驗采用非平衡法，取聚苯乙烯編號，按下表操作。                          NPY ? RIA  操作程序（單位：ul）              ————————————————————————————                試   劑      T     NSB     S0     S1~S5    樣  品              ————————————————————————————                緩 沖 液    ——    300     200    ——     ——                標(biāo) 準(zhǔn) 品    ——    ——    ——    200     ——                樣    品    ——    ——    ——   ——      200                抗    體    ——    ——     100    100      100                  ————————————————————————————                             搖勻，4℃  48小時              ————————————————————————————                             125I-NPY      100      100     100    100      100                  ————————————————————————————                                搖勻，4℃  24小時              ————————————————————————————                分 離 劑    ——     500    500     500     500              ————————————————————————————       混勻，室溫放置20分鐘，4℃3500轉(zhuǎn)/分 離心25分鐘，去上清，測定沉淀cpm值。    結(jié)果計算：     以N/T、B/T計算NSB、S0結(jié)合百分率，以B/B0計算標(biāo)準(zhǔn)及待測物結(jié)合百分率， 在半對數(shù)座標(biāo)紙上繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并查出樣品值或由自動Υ-計數(shù)儀器直接讀出結(jié)果。                     注：測兔標(biāo)本時，應(yīng)改用20%PEG500ul/管 分離。同時向 NSB、S0、 S1~S5 管              加Υ球蛋白液100ul/管；U、U0管加緩沖液100ul/管。    本試劑盒主要技術(shù)參數(shù)：      特異性：抗血清與7種常見的多肽類化合物的交叉反應(yīng)<1%。      靈敏度：<33pg/ml。可測范圍：33~1200 pg/ml。      精密度：批內(nèi)CVW<10%，批間CVb<15% 。         有效期：本藥盒4~8℃，保存有效期35天。        正常參考值：145.1±44.1 pg/ml。               本月藥盒參考數(shù)據(jù)：    —————————————————————————————————————————            T       NSB       S0            S1        S2           S3         S4         S5        —————————————————————————————————————————     CPM     —————————————————————————————————————————              N/T%          B0/T%        B/ B0 %       —————————————————————————————————————————