細(xì)胞核提取試劑盒
參考價(jià) | ¥ 15 |
訂貨量 | ≥1 |
- 公司名稱 北京索萊寶科技有限公司
- 品牌
- 型號(hào)
- 產(chǎn)地
- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)廠家
- 更新時(shí)間 2016/7/25 10:39:48
- 訪問次數(shù) 2421
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細(xì)胞核提取試劑盒
細(xì)胞核提取試劑盒說明書
貨號(hào):SN0020
規(guī)格:50T/100T
保存:短期使用可4℃儲(chǔ)存,*保存請置于-20℃或-70℃。產(chǎn)品內(nèi)容: 組份 | SN0020 -50 | SN0020-100 |
Lysis Buffer | 100 mL | 200 mL |
Reagent A | 2.5mL | 5mL |
Medium Buffer | 25 mL | 50 mL |
Store Buffer | 5 mL | 10 mL |
產(chǎn)品簡介:
用于從動(dòng)物細(xì)胞或組織中分離出完整而純化的細(xì)胞核。適合于動(dòng)物軟組織(肝或腦組織)和硬組織(肌肉)以及培養(yǎng)細(xì)胞的細(xì)胞核的制備。其制備物產(chǎn)量高,可以被用于細(xì)胞凋亡、信號(hào)傳遞、代謝和蛋白組學(xué)等的研究。產(chǎn)品不含污染性蛋白酶和核酶,性能穩(wěn)定。
操作步驟: 1. 樣本處理
a. 組織勻漿:稱取100~200 mg新鮮組織如肝臟、腦、心肌等,PBS或生理鹽水沖洗,洗凈血水,濾紙吸干,用剪刀剪為碎塊放入小容量玻璃勻漿器內(nèi)。加入1.0 mL預(yù)冷的Lysis Buffer,再加入50ulLReagent A , 0℃冰浴中上下研磨組織20次;有未研磨開的組織,可用雙層紗布過濾。 b. 培養(yǎng)細(xì)胞勻漿:消化細(xì)胞,PBS洗滌,800 g 離心5~10 min收集細(xì)胞,計(jì)數(shù)。每次提取需要5 ×107個(gè)細(xì)胞,加入1.0 mL冰預(yù)冷的Lysis Buffer重懸細(xì)胞,再加入50ul Reagent A,將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到小容量玻璃勻漿器內(nèi),0℃冰浴研磨細(xì)胞20~30次。2. 將組織或細(xì)胞勻漿物轉(zhuǎn)移到1.5ml離心管中,4℃,700g 離心5 min。細(xì)胞核沉淀在收集管底部,棄上清。加入0.5 mL冰預(yù)冷的Lysis Buffer重懸沉淀。3. 取另一新離心管內(nèi)加入0.5 mL Medium Buffer,吸取上一步的重懸液,沿管壁小心地加入到此離心管中,置于Medium Buffer之上,4℃,700 g 離心5min。細(xì)胞核沉淀在管底。4. 棄上清,在細(xì)胞核沉淀中加入0.5 mL Lysis Buffer重懸細(xì)胞核沉淀,1000g 離心10min ,棄上清,得到較純的細(xì)胞核沉淀。5. 用50-100μL Store Buffer 或合適的反應(yīng)緩沖液重懸細(xì)胞核沉淀,立即使用或-70℃保存。
注意事項(xiàng): 1. 為保證獲得完整的細(xì)胞核,務(wù)必做到:*,全程低溫操作;第二,快速;第三,在不破壞亞細(xì)胞器的情況下破碎細(xì)胞,這是制備細(xì)胞核的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。與組織塊相比,培養(yǎng)細(xì)胞特別是貼壁培養(yǎng)細(xì)胞在用玻璃勻漿器勻.