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采血操作方法

1.采血法 各種動物采血方法不一。馬、牛、羊等大動物一般從頸靜脈采血,豬從頸靜脈、前腔靜脈或耳靜脈采血,家禽由翼下靜脈或心臟采血,兔由心臟或耳靜脈采血,犬由頸靜脈或四肢靜脈采血,豚鼠由心臟采血,小白鼠則可斷尾或剪斷腋下血管或剪斷眼球采血。

2.抗凝 采集血液zui關(guān)鍵的問題是抗凝,采用什么方法進行抗凝,則根據(jù)實驗的要求和條件而定。zui常用的方法如下:

1)肝素抗凝:采血時,使每ml血液含15U~20U肝素即可。計算采集的血液量,按1 000U/ml的量加入肝素,直接放入采血容器中,采血時,邊采血邊輕輕搖動,使抗凝劑和血液混勻。對于采少量的血液或小動物采血,可直接用注射器抽取一定量的肝素液,再采血直接抗凝。

2EDTA抗凝:采血前,用滅菌生理鹽水將EDTA配制成4%溶液,然后按預(yù)采血液的量,以每ml血液加入1mg~2mgEDTA的液體量于采血容器內(nèi)。采血,并不斷搖動采血容器,使之混勻。

3)玻璃珠法:預(yù)先將適量的玻璃珠(根據(jù)采血量多少而定)清洗后,裝入采血容器中,滅菌后備用。采血過程中,邊采邊搖采血瓶,以使小玻璃珠在血液中滾動,以機械地除去纖維蛋白,使血液不能凝固。本法雖較麻煩,但對淋巴細胞的活性影響zui小,且可減少血小板的混雜。

4)阿氏液采血:以阿氏液和采血量以11比例采集血液,邊采邊輕輕搖動采血瓶,使之混勻。用阿氏液采血,除了抗凝外,多用于紅細胞的保存。一般在4條件下,阿氏液中保存的紅細胞2周其活性和特性不變。

1. 包被:用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為110μg/ml。在每個聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml4 過夜。次日,棄去孔內(nèi)溶液,用洗滌緩沖液洗3次,每次3分鐘。(簡稱洗滌,下同)。
2.
 加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置
37 孵育1小時。然后洗滌。(同時做空白孔,陰性對照孔及陽性對照孔)。
3.
 加酶標抗體:于各反應(yīng)孔中,加入新鮮稀釋的酶標抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.1ml。
37 孵育0.51小時,洗滌。
4.
 加底物液顯色:于各反應(yīng)孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml
37 1030分鐘。
5.
 終止反應(yīng):于各反應(yīng)孔中加入
2M硫酸0.05ml。
6.
 結(jié)果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結(jié)果:反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深,陽性程度越強,陰性反應(yīng)為無色或極淺,依據(jù)所呈顏色的深淺,以“+”、“-”號表示。也可測OD值:在ELISA檢測儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對照孔調(diào)零后測各孔OD值,若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍,即為陽性。

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