2024-11-26
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Sigma脫氧核糖核酸酶
一般描述
Sigma脫氧核糖核酸酶是一種從牛胰腺分離的核酸內(nèi)切酶。
我們的DNase I可將雙鏈和單鏈DNA酶解成寡核苷酸和單核苷酸。
牛胰腺DNase存在四種異構(gòu)酶A, B, C和D，均具有不同的等電點(diǎn)：5.22, 4.96, 5.06及4.78.3。主要形式為A，其次為B和C，D所占的比例最小。
DNase I結(jié)構(gòu)類似于核酸外切酶III。其中包括兩個(gè)中央β折疊。每個(gè)β折疊由六個(gè)β-鏈組成。這種復(fù)雜的β折疊被大量環(huán)形和螺旋形區(qū)域包圍。該酶結(jié)構(gòu)類似于核酸外切酶III。[1]
應(yīng)用
從原代細(xì)胞分離液中去除DNA，在降低粘度的同時(shí)提高產(chǎn)量：
將標(biāo)記堿基摻入DNA：DNA缺口
放射性標(biāo)記
生物工藝應(yīng)用：DNA去除
在RT-PCR前從RNA制劑中去除基因組DNA
體外轉(zhuǎn)錄
缺口平移
DNase足跡
肌動(dòng)蛋白調(diào)控胞內(nèi)肌動(dòng)蛋白聚合和細(xì)胞凋亡
蛋白質(zhì)與核酸紫外線交聯(lián)
DNase參與調(diào)控胞內(nèi)肌動(dòng)蛋白聚合，同時(shí)參與細(xì)胞凋亡過程 [1]
用于從蛋白質(zhì)樣品中除去 DNA。
生化/生理作用
Sigma脫氧核糖核酸酶是一種內(nèi)切核酸酶，可作用于與嘧啶相鄰的磷酸二酯鍵以產(chǎn)生具有末端5′-磷酸的聚核苷酸。當(dāng)Mg2+存在時(shí)，DNAse I可獨(dú)立切割DNA的每條鏈且切割位點(diǎn)是隨機(jī)的。當(dāng)Mn2+存在時(shí)，兩條DNA鏈都幾乎是在同樣的位置被切割。二價(jià)陽離子如Mn2+, Ca2+, Co2+以及Zn2+都是酶的激活劑。5 mM濃度的Ca2+可穩(wěn)定酶免收蛋白水解酶的消化。最適pH在7-8之間。來自牛胰腺的DNAse I由四種色譜可區(qū)分的組分A，B，C和D組成，它們的摩爾比分別為4:1:1。僅發(fā)現(xiàn)少量D。螯合劑、十二烷基硫酸鈉（SDS）和肌動(dòng)蛋白都已知可抑制酶的活性。
特點(diǎn)和優(yōu)勢(shì)
我們的脫氧核糖核酸酶DNAse I基本屬于不含RNAse產(chǎn)品，支持該產(chǎn)品應(yīng)用。
單位定義
一Kunitz單位的酶在以I型或III型DNA作為底物時(shí)，在 pH 5.0，37°C的條件下在每mL中每分鐘可引起0.001的A260改變。
外形
粗制品，含有氯化鈣
制備說明
溶液0.15 M NaCl的10 mg/mL DNAse I溶液分裝保存在?20 °C一周后可能會(huì)丟失<10%的活性。同樣的溶液保存在2-8 °C則可能丟失約20%的活性。當(dāng)在pH 5和7之間時(shí)，它可在60 °C維持活性最長達(dá)五小時(shí)，并在68 °C <10分鐘內(nèi)丟失活性。它在乙酸緩沖液（pH 5.0）和tris緩沖液((pH 7.2)，1 mg/mL濃度)中以6%/小時(shí)的速率丟失活性。
分析說明
通過縮二脲法測(cè)定的蛋白質(zhì)。
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