與傳統(tǒng)的MTT 法相比CCK-8細(xì)胞增殖毒性檢測試劑盒具有明顯的優(yōu)勢:
1.MTT 法生成的甲臜不是水溶性的,需要使用DMSO 等有機(jī)溶劑溶解;而CCK-8(CCK-8細(xì)胞增殖毒性檢測試劑盒) 產(chǎn)生的甲臜是水溶性的,省去了溶解步驟,因此減少了該操作步驟帶來的實(shí)驗(yàn)誤差。
2.由于CCK-8 產(chǎn)生的甲臜是水溶性的,無需吸掉培養(yǎng)基后,再用DMSO 等有機(jī)溶劑溶解,非常適合用于懸浮細(xì)胞的活性測定。
3.與MTT 方法相比,CCK-8 法線性范圍更寬,靈敏度更高。
4.CCK-8 法對細(xì)胞無毒性,可以多次測定,選取最佳測定時(shí)間。
5.CCK-8 法無需配制,即開即用。
6.CCK-8 法適合大規(guī)模、高通量的樣品檢測。
使用方法:
1.在96 孔板中配制100 μL 的細(xì)胞懸液。將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱預(yù)培養(yǎng)24 小時(shí)(在37℃,5% CO2的條件下)。
2.向培養(yǎng)板加入10 μL 的待測藥物進(jìn)行處理。
3.根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要,將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱孵育一段時(shí)間 (例如:6, 12,24 或48 小時(shí))。
注:如果不進(jìn)行藥物處理而直接測定細(xì)胞的活性,則不需要2-3 步驟,直接從第4 步操作。
4.向每孔加入10 μL CCK-8 溶液(注意不要在孔中生成氣泡,它們會影響O.D 值的讀數(shù))。
5.將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育2-4 小時(shí)。
6.用酶標(biāo)儀測定在450 nm 處的吸光度。
7.如果暫時(shí)不測定OD 值,可 以向每孔中加入10 μL 1% SDS(w/v) 溶液或者 0.1 M HCl 溶液,并蓋上培養(yǎng)板蓋子,在室溫條件下避光保存。24 小時(shí)內(nèi)吸光度不會發(fā)生變化。