2024-11-24
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病毒包裝跟慢病毒包裝步驟一樣：
1）轉(zhuǎn)染前1天，將293T細(xì)胞接種于10 CM培養(yǎng)皿中，加入15 mL含10％FBS的DMEM培養(yǎng)液，置37℃，5％CO2培養(yǎng)至約70－80％融合時，進(jìn)行細(xì)胞轉(zhuǎn)染。
2）轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞
?。?）將慢病毒表達(dá)質(zhì)粒和包裝質(zhì)粒加入到Opti-MEM中，混勻。
?。?）將適量的Lipofectamine? 2000 (invitrogen)加入到Opti-MEM中，混勻。
（3）5分鐘后，將上述兩混合液混勻，室溫靜置20分種后，將混合液加入至培養(yǎng)皿中，前后左右晃動搖勻。置37℃，5％CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
3）6小時后，換含10％FBS的DMEM培養(yǎng)液10mL。
4）轉(zhuǎn)染48小時后，收集病毒上清，500g離心10分鐘，0.45 μm濾器過濾。
5）濃縮純化后，分裝，-80℃保存。
慢病毒包裝原理
慢病毒表達(dá)質(zhì)粒包含了包裝、感染、穩(wěn)定整合宿主細(xì)胞基因組所需的遺傳信息，包裝輔助質(zhì)粒則提供了所有的轉(zhuǎn)錄、包裝和重組假病毒所需要的輔助蛋白。為產(chǎn)出高滴度的病毒顆粒，通常將表達(dá)質(zhì)粒和包裝質(zhì)粒共同轉(zhuǎn)染至包裝細(xì)胞中進(jìn)行病毒的包裝。包裝好的假病毒顆粒分泌到細(xì)胞外培養(yǎng)液中。通過收集含病毒顆粒的上清，進(jìn)行濃縮和純化可獲得高純度和高滴度的慢病毒。
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