流式JC-1檢測實驗

JC-1是一種廣泛用于檢測線粒體膜電位（ΔΨm）的熒光探針。在正常的線粒體中，JC-1聚集形成聚合物，發(fā)出紅色熒光；而在線粒體膜電位降低時，JC-1不能聚集，以單體形式存在，發(fā)出綠色熒光。通過測量紅色和綠色熒光的強(qiáng)度比值，可以評估線粒體的健康狀況和細(xì)胞凋亡的早期事件。

流式JC-1檢測實驗操作步驟

  1.JC-1工作液的配制：首先將JC-1固體粉末溶解在DMSO中制備存儲液，然后用緩沖液或培養(yǎng)基稀釋至工作濃度。

  2.細(xì)胞染色：將細(xì)胞與JC-1工作液共同孵育，以允許JC-1進(jìn)入線粒體并積累。孵育時間和溫度根據(jù)細(xì)胞類型和實驗要求而定。

  3.洗滌：孵育后，使用緩沖液洗滌細(xì)胞以去除未進(jìn)入線粒體的JC-1。

  4.流式細(xì)胞儀分析：使用流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞的紅色和綠色熒光，通過設(shè)置合適的激發(fā)和發(fā)射波長（通常是488nm激發(fā)和525nm/590nm發(fā)射）來分析JC-1的熒光信號。

  5.結(jié)果分析：根據(jù)紅色和綠色熒光的強(qiáng)度比值，評估線粒體膜電位的變化。線粒體去極化的細(xì)胞會顯示較低的紅色/綠色熒光比值。

實驗中的關(guān)鍵點和注意事項

  1.在實驗過程中應(yīng)避免直接光照射JC-1，因為它對光敏感。

  2.孵育和洗滌步驟應(yīng)在適宜的溫度下進(jìn)行，以保證JC-1能夠有效地進(jìn)入線粒體。

  3.使用流式細(xì)胞儀時，應(yīng)選擇合適的濾光片以區(qū)分紅色和綠色熒光。

  4.應(yīng)設(shè)置適當(dāng)?shù)年幮院完栃詫φ?，以驗證實驗條件的有效性。

  5.實驗后應(yīng)盡快進(jìn)行分析，以避免熒光淬滅。